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ELISPOT全名為酶聯免疫斑點檢測,英文:Enzyme-linkedImmunospotAssay。它結合了細胞培養技術與酶聯免疫吸附技術(即ELISA技術),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。其技術原理,一句話概括就是:用抗體捕獲培養中的細胞分泌的細胞因子,并以酶聯斑點顯色的方式將其表現出來(SedgwickJD2005)。該技術檢測細胞因子具有三大優點:其一,靈敏度高。在一百萬個陰性細胞中只要有一個分泌細胞因子的陽性細胞即可被檢測出來。這是目前為止,zui為靈敏的檢測技術,靈敏度比傳
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運用流式細胞儀計數細胞應注意的問題制作組織勻漿或細胞懸液,用熒光染料染色,則可以用流式細胞儀計數不同DNA含量或倍數的細胞數。例如,在睪丸組織中,精子細胞為單倍體細胞,精原細胞、Sertoli細胞、Leydig細胞和其他非生精細胞為雙倍體細胞,初級精母細胞以及處于分裂期的精原細胞和非生精細胞為四倍體細胞。因此,運用流式細胞儀測定睪丸組織各級生精細胞DNA倍體的變化,可以間接判斷不同生精細胞數目相對比例變化的趨勢。但是,利用這些結果得出結論時一定要謹慎。例如,單倍體細胞數所占百分比下降可能說明精子
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流式細胞儀的工作原理流式細胞儀主要由四部分組成:流動室和液流系統,激光源和光學系統,光電管和檢測系統,計算機和分析系統。四大系統共同完成信號的產生、轉換和傳輸任務。檢測時將待測細胞或微粒制成細胞懸液,進行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓人流動室,在高壓下磷酸緩沖液(鞘液)從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形流束(鞘流),待測細胞在鞘液包繞下單行排列,依次通過檢測區。流式細胞儀通常以激光作為發光源。經過聚焦后的光束,垂直
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眾所周之,每次給細胞換液體的時候都需要把細胞拿出來,然而就這一拿,“學問”就在里面:我們要盡量縮短細胞在培養箱外面的時間,盡量增加細胞在zui適環境中的時間。換液流程:1.將培養基放在37度水浴鍋內,準備好廢液缸、吸管、酒精棉球,干棉球,在超凈臺上,將照相機放在顯微鏡旁邊,然后開超靜臺紫外,開培養室紫外,開培養室風機,空調。2.30min后,進培養室。3.關紫外,開超凈臺風機,酒精擦手,關水浴鍋,將水浴鍋內的培養基放在超凈臺上,用干棉球擦干,然后開蓋,準備好吸管。4.這個時候再從培養箱里將培養瓶
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簡介細胞培養的成功很大程度上取決于保護細胞免受細菌、真菌和病毒等微生物的污染。非無菌物品、培養基和試劑、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養箱和污染的工作臺面均是導致微生物污染的來源。無菌技術的作用是在環境微生物與無菌的細胞培養物之間形成一道屏障,它通過一套操作流程來降低培養物被上述污染源污染的可能。無菌技術的組成要素包括:無菌工作區域、良好的個人衛生、無菌試劑和培養基以及無菌操作。無菌工作區域zui為簡單、經濟的減少空氣顆粒和氣體揮發(例如:灰塵、芽孢、皮屑、噴嚏)污染的方法就是采用細胞培養通風
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一、實驗原理細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行培養為原代培養;當原代培養的細胞增殖達到一定密度后,則需要做再培養,即將培養的細胞分散后,從一個容器以1:2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養,為傳代培養,傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少
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一、實驗目的1、掌屋凋亡細胞的形態特征2、學會用熒光探針對細胞進行雙標記來檢測正?;罴毎?、凋亡細胞和壞死細胞的方法二、實驗原理細胞死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界,在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合,是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態學和生物化學特征。在形態上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸,細胞變園,細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質網擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀