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【材料與試劑】（1）30%的丙烯酰胺：分別稱取29g丙烯酰胺，1gN,N-亞甲雙丙烯酰胺加溫熱的去離子水60ml，加熱至37℃溶解，補加水至終體積為100ml,過濾，即配成30%（w/v）丙烯酰胺貯存溶液。丙烯酰胺和雙丙烯酰胺在貯存過程中緩慢轉變為丙烯酸和雙丙烯酸，這一脫氨基反應是光催化或堿催化，故溶液的pH值不超過7.0，應置于棕色瓶中4℃保存。（2）10%十二烷基硫酸鈉（SDS）：稱取10gSDS加去離子水90ml加熱至68℃，加幾滴濃鹽酸調節至pH7.2加水至100ml，即為10%（w/v
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水化上樣（被動上樣）1.從冰箱中取出IPG膠條，室溫放置10min。2.沿水化盤槽的邊緣從左向右線性加入樣品，槽兩端各1cm左右不加樣，中間的樣品液一定要連貫。注意：不要產生氣泡，否則會影響膠條中蛋白質的分布。3.用鑷子輕輕撕去IPG膠條上的保護層。注意：堿性端較脆弱，應小心操作。4.將IPG膠條膠面朝下輕輕置于水化盤中樣品溶液上。注意：不要將樣品溶液弄到膠條背面，因為這些溶液不會被膠條吸收；還使膠條下面的溶液產生氣泡。如產生了氣泡，用鑷子輕輕地提起膠條的一端，上下移動膠條，直到氣泡被趕走。5.
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一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。目前多用精制的proreinA預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的pror
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目的要求（1）了解克隆基因表達的方法和意義。（2）了解重組蛋白親和層析分離純化的方法。實驗原理克隆基因在細胞中表達對理論研究和實驗應用都具有重要的意義。通過表達能探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理，同時克隆基因表達出所編碼的蛋白質可供作結構與功能的研究。大腸桿菌是目前應用zui廣泛的蛋白質表達系統，其表達外源基因產物的水平遠高于其它基因表達系統，表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的80%。本實驗中，攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有
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蛋白質技術專題：蛋白質免疫印跡（Western Blot ）
標簽：western-blot免疫印跡蛋白質蛋白質免疫印跡（WesternBlot）可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法底物化學發光ECL法Western印跡法圖解實驗方法原理Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體 -
標簽：差示反轉錄PCR差示反轉錄PCR也稱為mRNA差異顯示技術，它是將mRNA反轉錄技術與PCR技術二者相互結合發展起來的一種RNA指紋圖譜技術，具有簡便、靈敏、RNA用量少、效率高、可同時檢測兩種或兩種以上經不同處理或處于不同發育階段的樣品，該方法自問世以來已被廣泛用于差異表達基因的克隆鑒定研究中。實驗方法mRNA差異顯示法熒光標記法實驗方法原理幾乎所有的真核基因mRNA分子的3’-末端，都帶有一個多聚的腺苷酸結構，即通常所說的poly（A）尾巴。因此，在RNA聚合酶的作用下，可按mRNA為
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[實驗原理]根據決定某等位基因的堿基性質，設計3′端*個堿基分別與各等位基因的特異性堿基相匹配的序列特異性引物，在PCR反應過程中，只有引物3′端*個堿基與決定特定等位基因的堿基互補時才能實現DNA片段的*復制，根據PCR產物的有無進行等位基因的分型。[實驗器材]PCR擴增儀、電泳儀、電泳槽。[實驗試劑]引物1：5′-GCATCAAGTACCACTGGT-3′；引物2：5′-GCATTAAGTACCACTGAG-3′；共通引物：5′-GAGAAGTTGAGAAAGGGGT-3′。模板DNA、Ta
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與直接原位PCR所不同的是，靶基因在擴增時不進行標記基團的摻入，而是標記一段與擴增片段互補的探針，在擴增結束后，應用此探針進行原位雜交。因此，此處主要介紹原位雜交，其余方法同原位PCR。一、預雜交1.試劑與配制2×SSC50%去離子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v）預雜交液：2×SSC，5%硫酸葡聚糖，50%甲酰胺，0.2%脫脂奶粉2.操作方法①在進行完原位PCR擴增后，用2×SSC預浸經乙醇脫水、空氣干燥的玻片，并簡洗15min；②用50%去離子甲酰胺37℃孵育15min；③加預雜交液20μl
