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實驗試劑LB培養基，KB培養基，10%甘油，液氮，0.1MCaC12溶液實驗設備超凈工作臺，搖床，離心機，250mL離心瓶，0.5mL的離心管實驗材料大腸桿菌，農桿菌和假單胞桿菌實驗步驟1.電擊感受態細胞的制備1）-80℃保存的大腸桿菌，農桿菌或者假單胞桿菌在固體平板上（DH，BL21在LB平板上，GV3101在LB/Gen;P.s.pv.tomato0288-9和P.syringaepv.tabaci6505在KB平板上）劃線。2）接種單克隆于5-10mL液體培養基，37℃（大腸桿菌）或者28
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1.在6孔板中接種1~3×105細胞/孔，加入2ml*培養基，置CO2孵箱中37℃培養過。2.待細胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：i.溶液A：將4?g待轉染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養基中，靜置5minii.溶液B：將2-25?lLipofectAMINE稀釋到250?l無血清培養基中，靜置5min3.混合溶液A和B，輕輕混勻，室溫放置15-45min。4.用2ml無血清培養基輕輕洗滌細胞，加入0.8ml無血清培養基/孔，將脂質體復合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置
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1．目的學會用酶切法或PCR法篩選重組質粒轉化成功的克隆菌。2．原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片斷的克隆菌落。3．器材旋渦混合器，小鑷子，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml微量離心管，雙面微量離心管架，干式恒溫氣浴（或恒溫水浴鍋），制冰機，恒溫搖床，超凈工作臺，酒精燈，無菌牙簽，搖菌管。4．試劑LB培養基（加抗菌素），PCR用試劑，引物，質粒提取用試劑，酶切需要的限制性內且酶及其緩沖液，65%甘油（65%甘油，0
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原理：通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術，將靶基因導入細胞，一般在轉染后48小時左右，靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。應用：觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應會很快丟失）。一般流程：1）細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋。2）細胞轉染（脂質體、電穿孔、FuGENE6等）3）48小時以后鑒定目的基因的表達情
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一、電轉化感受態細胞的制備1.用槍頭挑取單克隆菌落，投入盛有10mlLB液體培養基的50ml離心管中。（同時做培養基和槍頭的空白對照）2.37℃，220rpm，培養14-16個小時。3.第二天，以1：100的比例將這10ml菌液倒入1000mlLB液體培養基中，37度，220rpm，振搖2-3小時，每半小時測一次OD，當OD值達到0.3-0.4時，停止培養。4.將菌液在冰上預冷30分鐘，隨后將菌液分裝到500ml預冷的離心杯中，4℃，2500rpm離心10分鐘。5.棄上清，離心杯中加入少量ddH
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材料和試劑1.恒溫旋轉式搖床2.三角燒瓶（容量為1或2L）3.50ml滅菌離心管4.低溫高速離心機5.SB培養基細菌培養用胰化蛋白胨20g細菌培養用酵母提取物5gNaCl0.5g去離子水950ml250mmol/LKCl溶液10ml以5N的NaOH調節溶液的pH值至7.0，加去離子水至1L，高壓蒸氣滅菌。6.20%葡萄糖溶液7.1mol/LMgCl2溶液8.10%甘油操作步驟1.從新鮮的LB平板培養物中挑選一個TG1克隆，接種于10m1SB培養基中。2.37℃搖床培養過。3.取2.5ml培養物轉
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一.試劑配制無菌水ddw：高溫滅菌；分裝；2XHBS：280mMNaCl10mMKCl1.5mMNa2HPO412mMglucose50mMHEPESAdjustthepH,every0.05pHfrom7.00to7.45using10NNaOH,thenaddddw.tothefinalvolume.過濾滅菌，分裝；2MCaCl2：過濾滅菌，分裝。二.實驗過程：1.鋪細胞：選擇狀態良好的293T細胞傳代，2-3x105個細胞/35mmdish。2.20-24h后，待細胞長至鋪滿瓶底約50-7
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一、原理1、E.coli表達系統E.coli是重要的原核表達體系。在重組基因轉化入E.coli菌株以后，通過溫度的控制，誘導其在宿主菌內表達目的蛋白質，將表達樣品進行SDS-PAGE以檢測表達蛋白質。2、外源基因的誘導表達提高外源基因表達水平的基本手段之一，就是將宿主菌的生長與外源基因的表達分成兩個階段，以減輕宿主菌的負荷。常用的有溫度誘導和藥物誘導。本實驗采用異丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）誘導外源基因表達。不同的表達質粒表達方法并不*相同，因啟動子不同，誘導表達要根據具體情況而定。二
