皖儀科技離子色譜法測定唾液中的葡萄糖濃度
引言
無創血糖檢測一直備受青睞，人唾液具有生物信息豐富、采集安全方便等優點，是無創血糖檢測的理想媒介。作為血糖標志物之一的唾液葡萄糖（唾液糖）因時效性更強，可反映血糖實時信息，受到廣泛研究。經研究發現糖尿病患者的唾液糖均值明顯高于糖代謝正常人群。當唾液糖濃度≥20 mg/L時，唾液糖與血糖水平呈顯著正相關，且此時相關系數r最大。
T/SZJL 4-2023團體標準，實驗離子色譜法測定人唾液中的葡萄糖含量。已于2023年10月10日正式實施。
皖儀開發了一種離子色譜測試方法檢測人唾液中的葡萄糖含量，樣品前處理操作簡單，重現性好，準確性高，完全滿足T/SZJL 4-2023團體標準在對人唾液中葡萄糖的測試要求。
關鍵詞：離子色譜；食品；葡萄糖；方法學驗證
1 實驗方法
1.1測試條件
皖儀科技IC6300系列離子色譜儀
儀器：IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測器（Au工作電極）
自動進樣器：AS2800/AS3110
色譜柱：糖類專用色譜柱（4.0mm×250mm）；
保護柱：糖類專用保護柱（30 mm×4 mm）；
柱溫：30℃；
流速：0.45ml/min；
進樣量：250μL；
檢測模式：脈沖積分
1.2 使用試劑
淋洗液：A:超純水 B：100mM NaOH C:50mM NaOH+125mM CH3COONa
標樣：葡萄糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質；
樣品：人唾液
1.3樣品制備
刺激性唾液收集：采集時將采集管中的棉棒放入口中咀嚼3~5min，待唾液浸潤棉棒后，把棉棒放回唾液收集管，離子（4000r/min，10min）取上清液（唾液量≥1mL）。
唾液處理：將收集到的唾液樣本立即置于95℃水溶液中30min后去除，自然冷卻到室溫，經臺式離心機（4000r/min,10min）離心，取上清液，用孔徑0.22μm的水系濾膜過濾。最后取適量濾液用水稀釋后（唾液量和稀釋倍數根據葡萄糖濃度具體調節），上機檢測
1.4 標準溶液制備
混合標準溶液儲備液：準確稱取0.1g（精確至0.1mg）葡萄糖標準品，用超純水溶解，轉移至100mL容量瓶中，定容至刻度，配制成濃度為1000mg/L的標準儲備液。置于0℃~4℃密封，保存期1個月。
標準工作液:分別移取標準儲備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作標準液?，F配現用。
1.5 標準曲線的制備
葡萄糖工作標準液:分別移取標準儲備液于100mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配制成濃度為0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作標準液。臨用現配。
表1. 標準系列曲線濃度梯度表
2 測試結果
2.1 葡萄糖線性測試結果
依次移取0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的系列標準工作曲線，按照1.1工作測試條件得到標準曲線譜圖多點重疊圖如圖1，葡萄糖在該色譜條件下線性相關系數R=0.999以上，線性良好。
圖1.食品中五種糖標準曲線重疊色譜圖
表2. 線性方程
2.2 樣品測試譜圖
在1.1的工作測試條件下條件下，將人唾液樣品進行檢測。對樣品進行精密度測試。樣品重復性測試圖譜如圖2所示，樣品圖譜中的目標離子峰形對稱，分離度良好，最終得到樣品中葡萄糖含量6.7052mg/L。
圖2. 樣品重疊譜圖
2.3 樣品精密度測試結果
在1.1的工作測試條件下，再次收集人唾液樣品進行檢測。對樣品進行精密度測試，測試圖譜如圖3所示，樣品圖譜中的目標離子峰形對稱，分離度良好，最終得到復現樣品中葡萄糖含量12.0558mg/L。
圖3. 樣品復現測試重疊譜圖
2.4 檢出限測試
在空白樣品中加標準溶液2μg/L，對標準品進行檢出限測定，測試結果如圖4所示，其中葡萄糖信噪比為61.607，具體檢出限和定量限如表三所示，低于方法（T/SZJL 4-2023團體標準）中樣品的定量限的0.11μg/L要求；
圖4. 檢出限測試圖譜
表3. 檢出限與定量限測定表
2.5 樣品加標回收重復性測試結果
分別向樣品加2mg/L、4mg/L、6mg/L的標準品，每個濃度3個平行樣品進行測定，其測定譜圖分別如圖5-7所示，其回收率在96.10％~99.50％。
圖5加標2mg/L測試圖譜
圖6. 加標4mg/L測試圖譜
圖7加標6mg/L測試圖譜
3 總結
本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300對人唾液中的葡萄糖測試進行系統適用性、標準曲線驗證、重復性驗證、加標回收率驗證。測試結果峰形較好，線性良好，重復性高，靈敏度高，完全滿足T/SZJL 4-2023團體標準對人唾液中的葡萄糖測試要求。
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