猴IVD組磷脂酶A2(PLA2G4D)酶聯免疫試劑盒  

樣本實驗準備

        在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，最好-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。

液體類標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2. 血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

3. 尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4. 細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

5. 培養細胞

    檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

6. 組織標本

    切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

猴IVD組磷脂酶A2(PLA2G4D)酶聯免疫試劑盒

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的抗原和其他雜質。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結合位點，以減少非特異性結合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的阻斷液和其他雜質。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發生特異性結合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的樣本和其他雜質。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結合的樣本中的待測物質發生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的酶標抗體和其他雜質。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發生酶催化反應，產生有色產物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數據。

試劑盒組成

結果計算方法如下

1.計算陰性對照A值的平均數(NCX )和陽性對照A值的平均數(PCX)。

2.兩個平均數的差(P-N)必須大于一個特定的數值，例如0.400，試驗才有效。

3.3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。

4.陽性判定值按下式計算：陽性判定值=NCX+0.05。

5.標本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。

需要注意的是，試劑盒的常數只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。

注意事項

1. 實驗前請仔細閱讀本試劑盒的使用說明，確保所有材料、器具和試劑準備齊全。

2. 為保證實驗結果的準確性，請務必遵循實驗步驟進行操作，并注意控制實驗條件的一致性。

3. 實驗過程中請勿觸摸酶標板上的酶標抗體區域，以免影響實驗結果。

4. 實驗結束后請及時清洗并整理實驗器具，避免交叉污染。

5. 本試劑盒僅供體外診斷使用，使用前請仔細閱讀說明書，如有疑問請及時聯系廠家或專業技術人員。

試劑盒性能

1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。

合作單位

中國醫科大學、復旦大學、北京大學、貴陽醫學院、中國農業大學

天津疾控中心、江南大學、山東大學、青島大學、香港大學

云南省產品質量監督檢驗研究院

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