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上海市
96T 2500元 1000盒可售
48T 1450元 1000盒可售
更新時間:2024-09-09 11:51:02瀏覽次數(shù):191次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)猴β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)酶聯(lián)免疫試劑盒
猴神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG-2)ELISA試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
猴胱天蛋白酶4(CASP4)酶聯(lián)免疫試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T(可拆)
產(chǎn)品數(shù)量:咨詢
產(chǎn)品應用:ELISA實驗
產(chǎn)品貨期:現(xiàn)貨
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
準備工作
1.孔板室溫平衡1小時
2.做好布板圖譜
3.樣本解凍
4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒
5.準備雙蒸水
6.根據(jù)樣本量配好樣本希釋液
7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液
8.若需要提前設置好振板器、洗板器
9.準備足夠量的擦手紙
10.根據(jù)說明書提示,溶解標準品
11.配制不同濃度的標準品
12.配制質(zhì)控品
13.根據(jù)預實驗結果稀釋樣本
14.準備好封板膜
實驗步驟
1. 抗原包被:將抗原溶液加入到酶標板孔中,包被抗原,使其在孔底形成一層薄膜。
2. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的抗原和其他雜質(zhì)。
3. 阻斷:加入阻斷液,封閉酶標板孔中的非特異性結合位點,以減少非特異性結合。
4. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的阻斷液和其他雜質(zhì)。
5. 加樣:加入待測樣本,使其與抗原發(fā)生特異性結合。
6. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的樣本和其他雜質(zhì)。
7. 加酶標抗體:加入酶標記的抗體,使其與特異性結合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應。
8. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的酶標抗體和其他雜質(zhì)。
9. 顯色反應:加入底物溶液,發(fā)生酶催化反應,產(chǎn)生有色產(chǎn)物。
10. 終止反應:加入終止液,停止酶催化反應。
11. 檢測:用酶標儀測定各孔的光密度值,記錄數(shù)據(jù)。
注意事項
在進行ELISA檢測時,需要注意以下幾點:
1. 保證試劑盒的質(zhì)量:選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認證的試劑盒,避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。
2. 標準化操作:按照試劑盒說明書進行標準化操作,避免操作過程中的人為誤差。
3. 避免交叉污染:在實驗過程中,要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染,以免影響檢測結果的準確性。
4. 溫度控制:ELISA檢測需要在恒溫條件下進行,因此要確保實驗過程中溫度的穩(wěn)定和準確性。
5. 空白吸光度值:在實驗過程中,要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性,避免其對檢測結果的影響。
6. 實驗數(shù)據(jù)的處理:對實驗數(shù)據(jù)進行正確的處理和分析,包括對異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等,以確保結果的準確性和可靠性。
7. 質(zhì)量控制:在實驗過程中,應進行必要的質(zhì)量控制,如定期進行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評等,以確保實驗室檢測結果的準確性。
猴胱天蛋白酶4(CASP4)酶聯(lián)免疫試劑盒
洗板方法
1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5次。
2.自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
結果判斷:
1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設置復孔,則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標,標準品的濃度為縱坐標,繪出標準曲線。
2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件,如curve expert 1.3或1.4,在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值,由標準曲線查出相應的濃度,乘以稀釋倍數(shù);亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
3. 若樣品OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。
做ELISA標準曲線時需要重點注意的細節(jié)問題:
1、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限;而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2、檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
3、標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
4、做出的標準曲線相關系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f,相關系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。
5、樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。
6、好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
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