僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

猴B細胞連接蛋白(BLNK)酶聯免疫試劑盒  

產品規格：96T/48T（可拆）

產品數量：咨詢

產品應用：ELISA實驗

產品貨期：現貨

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

試劑盒組成

操作步驟

1. 包被：將抗原溶液加入聚苯乙烯酶標板孔中，包被抗原，37℃孵育1小時。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的抗原和其他雜質。

3. 阻斷：加入阻斷液，37℃孵育30分鐘，以封閉酶標板上的非特異性結合位點。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的阻斷液和其他雜質。

5. 加樣：加入標準品和待測樣本，37℃孵育1小時。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的蛋白質。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，37℃孵育1小時。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的酶標抗體。

9. 顯色：加入TMB底物溶液，37℃孵育15-30分鐘。

10. 終止反應：加入終止液，停止顯色反應。

11. 檢測：在450nm波長下讀取吸光度值（OD值）。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N"倍，標本的濃度應再乘以“N"。 

標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品xi釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 

生物su標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物su標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標記抗體加990μl生物su標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 

辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 

猴B細胞連接蛋白(BLNK)酶聯免疫試劑盒  

操作注意事項

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標準品可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍，終結果乘以5才是樣本終濃度。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請以中文說明書為準。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

結果分析

根據試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數據處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

試劑盒 必知說明：

1）只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，

2）不能混用其他制造商的產品，只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到好的檢測結果。

3）由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。

4）實驗結果與試劑盒的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關。

5）請務必準備充足的標本備份。

6）不同批次的同一產品可能會有少許差別。

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