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猴輔肌動蛋白α3(ACTN3)酶聯免疫試劑盒
實驗原理
酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結合,通過酶對底物反應的顯色反應,對樣本中的待測物質進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點,因此在生物醫學研究、臨床診斷和食品安全檢測等領域得到了廣泛應用。
產品包裝:盒裝
性狀:瓶裝液體
規格:96T/48T
保存條件:2-8℃
保存期限:6個月
運輸條件:2-8℃低溫運輸,用干冰或者生物冰袋低溫運輸。
準備工作
1.孔板室溫平衡1小時
2.做好布板圖譜
3.樣本解凍
4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒
5.準備雙蒸水
6.根據樣本量配好樣本xi釋液
7.根據樣本量及洗板次數配好洗液
8.若需要提前設置好振板器、洗板器
9.準備足夠量的擦手紙
10.根據說明書提示,溶解標準品
11.配制不同濃度的標準品
12.配制質控品
13.根據預實驗結果稀釋樣本
14.準備好封板膜
猴輔肌動蛋白α3(ACTN3)酶聯免疫試劑盒
實驗步驟
1. 抗原包被:將抗原溶液加入到酶標板孔中,包被抗原,使其在孔底形成一層薄膜。
2. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的抗原和其他雜質。
3. 阻斷:加入阻斷液,封閉酶標板孔中的非特異性結合位點,以減少非特異性結合。
4. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的阻斷液和其他雜質。
5. 加樣:加入待測樣本,使其與抗原發生特異性結合。
6. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的樣本和其他雜質。
7. 加酶標抗體:加入酶標記的抗體,使其與特異性結合的樣本中的待測物質發生反應。
8. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的酶標抗體和其他雜質。
9. 顯色反應:加入底物溶液,發生酶催化反應,產生有色產物。
10. 終止反應:加入終止液,停止酶催化反應。
11. 檢測:用酶標儀測定各孔的光密度值,記錄數據。
試劑盒組成
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 23ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注意事項
在進行ELISA檢測時,需要注意以下幾點:
1. 保證試劑盒的質量:選擇質量可靠、經過認證的試劑盒,避免使用過期或質量不穩定的試劑。
2. 標準化操作:按照試劑盒說明書進行標準化操作,避免操作過程中的人為誤差。
3. 避免交叉污染:在實驗過程中,要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染,以免影響檢測結果的準確性。
4. 溫度控制:ELISA檢測需要在恒溫條件下進行,因此要確保實驗過程中溫度的穩定和準確性。
5. 空白吸光度值:在實驗過程中,要特別注意空白吸光度值的穩定性,避免其對檢測結果的影響。
6. 實驗數據的處理:對實驗數據進行正確的處理和分析,包括對異常值的處理、數據轉換等,以確保結果的準確性和可靠性。
7. 質量控制:在實驗過程中,應進行必要的質量控制,如定期進行室內質控和室間質評等,以確保實驗室檢測結果的準確性。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗室安全
1. 實驗室應定期進行安全檢查,確保設備、設施完好有效。
2. 實驗室應按規定配備消防器材、急救箱等安全設施,并定期檢查其使用狀態。
3. 在實驗室內不得擅自更改電器線路或使用未經批準的電器設備。
4. 實驗室內的消防通道、安全出口等應保持暢通無阻,嚴禁堆放雜物。
5. 在進行高溫、低溫、高壓、真空等危險性實驗時,必須采取相應的安全措施,確保人員和設備安全。
6. 實驗室內嚴禁吸煙和吃東西,以免引起火災或中毒等安全事故。
7. 在實驗室內應保持安靜,不得大聲喧嘩或擅自離崗,以免影響實驗的進行和實驗室的安全。
8. 實驗室內的門窗、玻璃等易損部位應保持完好無損,如有損壞應及時報修。
9. 在進行易燃、易爆、有毒、有害或其他危險性實驗時,必須至少有兩人同時在場,以便相互照應和應對突發情況。
10. 實驗室內的儀器、試劑等應按規定進行標識和管理,以確保使用正確和安全可靠。
11. 實驗室內應保持適宜的溫度和濕度,避免影響實驗結果和設備的正常運行。
12. 在實驗室內不得私自拆卸或修理設備儀器,如有需要應請專業人員協助處理。
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