猴血紅蛋白β(HBβ)ELISA試劑盒  

實驗原理

酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結合，通過酶對底物反應的顯色反應，對樣本中的待測物質進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點，因此在生物醫學研究、臨床診斷和食品安全檢測等領域得到了廣泛應用。

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的抗原和其他雜質。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結合位點，以減少非特異性結合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的阻斷液和其他雜質。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發生特異性結合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的樣本和其他雜質。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結合的樣本中的待測物質發生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的酶標抗體和其他雜質。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發生酶催化反應，產生有色產物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數據。

試劑盒組成

注意事項

在進行ELISA檢測時，需要注意以下幾點：

1. 保證試劑盒的質量：選擇質量可靠、經過認證的試劑盒，避免使用過期或質量不穩定的試劑。

2. 標準化操作：按照試劑盒說明書進行標準化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結果的準確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩定和準確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩定性，避免其對檢測結果的影響。

6. 實驗數據的處理：對實驗數據進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數據轉換等，以確保結果的準確性和可靠性。

7. 質量控制：在實驗過程中，應進行必要的質量控制，如定期進行室內質控和室間質評等，以確保實驗室檢測結果的準確性。

猴血紅蛋白β(HBβ)ELISA試劑盒   

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

結果判斷:

1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2. 推薦使用專業的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。 

合作單位:

中國醫科大學、復旦大學、北京大學、貴陽醫學院、中國農業大學

天津疾控中心、江南大學、山東大學、青島大學、香港大學

云南省產品質量監督檢驗研究院

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