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猴骨成型蛋白1(BMP-1)ELISA試劑盒
檢測前準備工作:
1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現象,可用40℃水浴微加熱使結晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
4. 生物su化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
5. 酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。
當日使用。
實驗原理
酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的免疫學檢測技術,其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結合反應,通過酶促反應放大信號,檢測微量的蛋白質、細胞因子等生物活性物質。ELISA實驗中所需的試劑和耗材需滿足一定的質量要求,以保證實驗結果的準確性和可靠性。
試劑盒特點
1. 特異性高:由于是抗原抗體的特異性結合,因此試驗的特異性很高,能夠排除其他物質的干擾。
2. 靈敏度高:由于酶的放大作用,使得試驗的靈敏度大大提高,能夠檢測出微量的抗原或抗體。
3. 操作簡便:ELISA試驗操作相對簡單,容易掌握,適合于大規模樣本檢測。
4. 適用范圍廣:可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。
猴骨成型蛋白1(BMP-1)ELISA試劑盒
實驗步驟
1. 抗原包被:將抗原溶液加入到酶標板孔中,包被抗原,使其在孔底形成一層薄膜。
2. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的抗原和其他雜質。
3. 阻斷:加入阻斷液,封閉酶標板孔中的非特異性結合位點,以減少非特異性結合。
4. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的阻斷液和其他雜質。
5. 加樣:加入待測樣本,使其與抗原發生特異性結合。
6. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的樣本和其他雜質。
7. 加酶標抗體:加入酶標記的抗體,使其與特異性結合的樣本中的待測物質發生反應。
8. 清洗:清洗酶標板,去除未結合的酶標抗體和其他雜質。
9. 顯色反應:加入底物溶液,發生酶催化反應,產生有色產物。
10. 終止反應:加入終止液,停止酶催化反應。
11. 檢測:用酶標儀測定各孔的光密度值,記錄數據。
結果分析
根據試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值,利用標準品繪制的標準曲線,計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數據處理,通過計算得到待測樣品的濃度。
注意事項
在進行ELISA檢測時,需要注意以下幾點:
1. 保證試劑盒的質量:選擇質量可靠、經過認證的試劑盒,避免使用過期或質量不穩定的試劑。
2. 標準化操作:按照試劑盒說明書進行標準化操作,避免操作過程中的人為誤差。
3. 避免交叉污染:在實驗過程中,要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染,以免影響檢測結果的準確性。
4. 溫度控制:ELISA檢測需要在恒溫條件下進行,因此要確保實驗過程中溫度的穩定和準確性。
5. 空白吸光度值:在實驗過程中,要特別注意空白吸光度值的穩定性,避免其對檢測結果的影響。
6. 實驗數據的處理:對實驗數據進行正確的處理和分析,包括對異常值的處理、數據轉換等,以確保結果的準確性和可靠性。
7. 質量控制:在實驗過程中,應進行必要的質量控制,如定期進行室內質控和室間質評等,以確保實驗室檢測結果的準確性。
科研產品合作單位:
吉林大學
浙江大學
農業大學
華東理工大學生工學院
福建師范大學
浙江工業大學
北京化工大學
南通大學
同濟大學
華南理工大學
浙江工業大學
廣西大學
東華農業大學
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