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猴白介素24 (IL-24)酶聯免疫試劑盒
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯吸附試驗(ELISA)。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
檢測前準備工作
1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現象,可用40℃水浴微加熱使結晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
4. 生物su化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
5. 酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。
當日使用。
實驗步驟
1. 準備:準備好所有試劑、材料和器具。
2. 溫育:將包被有特異性抗體的酶標板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。
3. 加樣:分別向各孔中加入標準品、待測樣本,輕輕混勻。
4. 溫育:將酶標板放入37℃溫箱中繼續溫育30分鐘。
5. 洗滌:清洗酶標板,除去未結合的抗原抗體。
6. 加酶標二抗:向各孔中加入酶標二抗,輕輕混勻。
7. 溫育:將酶標板放入37℃溫箱中繼續溫育30分鐘。
8. 洗滌:清洗酶標板,除去未結合的酶標二抗。
9. 加底物溶液:向各孔中加入底物溶液,輕輕混勻。
10. 顯色:將酶標板放入37℃溫箱中繼續溫育15分鐘。
11. 終止:向各孔中加入終止液,混勻。
12. 測量:在450nm波長下測量各孔的光密度值(OD值)。
注意事項
1. 試劑盒保存于2-8℃,切勿反復凍融或長時間保存于室溫。
2. 實驗前確保所有試劑均已恢復至室溫。
3. 加樣時注意避免產生氣泡。
4. 洗滌時要保證充分洗滌,避免殘留物影響實驗結果。
5. 底物溶液應避光保存,避免長時間暴露于空氣中。
6. 酶標儀應使用450nm波長進行讀數,其他波長可能導致誤差。
7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考,不適用于臨床診斷和治療。
猴白介素24 (IL-24)酶聯免疫試劑盒
洗板方法
1.手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5次。
2.自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
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