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深圳市艾瑞斯儀器有限公司
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原理及用途
赭曲霉毒素是曲霉菌屬和青霉菌屬的某些種產(chǎn)生的二級代謝產(chǎn)物。其中赭曲霉毒素A在自然界分布最廣，毒性最強(qiáng)，對人類和動植物影響最大。
深圳艾瑞斯生產(chǎn)的采用間接競爭ELISA方法檢測米面、花生、大豆等谷物及飼料樣本中的赭曲霉毒素(Ochratoxins A，OTA)，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的赭曲霉毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗赭曲霉毒素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含赭曲霉毒素含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中赭曲霉毒素的殘留量。
技術(shù)指標(biāo)
1 試劑盒靈敏度：1ppb(ng/ml)
2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min
3 檢測下限：
谷物…………………………5ppb
飼料…………………………10ppb
4 交叉反應(yīng)率：
赭曲霉毒素A…………………………………100%
5 樣本回收率：
谷物及配合飼料…………………………85%±15%
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
1 編 號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光反應(yīng)30分鐘。
3 洗 滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100µl/孔，37℃避光反應(yīng)30分鐘。
5 洗 滌：同上
6 顯 色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時間）。
7 終 止：加終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
8 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
