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深圳市艾瑞斯儀器有限公司
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原理及用途
深圳艾瑞斯生產(chǎn)玉米赤霉烯酮酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料、食用油、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）（又稱F-2 毒素），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液，樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗玉米赤霉烯酮抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。
樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
配液：
配液1：樣本提取液
90%甲醇，即V甲醇:V去離子水=9：1。
配液2：工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
樣本前處理步驟：
谷物（大米、玉米、小米等低脂含量）及其食品原料
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml樣本提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水，混勻；
3）取50μl進(jìn)行分析。
稀釋倍數(shù)：20 檢測下限：6ppb
飼料及飼料原料
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml樣本提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取0.5ml上清，加入1ml提取液，震蕩混勻；
3）取0.5ml混勻液體，加入2ml去離子水，混勻；
4）取50μl進(jìn)行分析。
稀釋倍數(shù)：60 檢測下限：18ppb
玉米皮、麥麩等吸水性強(qiáng)的樣本
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加24ml樣本提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水，混勻；
3）取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：60 檢測下限：18ppb
注：由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài)，取樣時需多點(diǎn)取樣充分混勻后再取2g進(jìn)行試驗(yàn)。
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
1 編 號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。
3 洗 滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
4 顯 色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時間）。
5 終 止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
結(jié)果分析
1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝A×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
