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PureCube磁珠使用指南
磁珠蛋白純化操作指南
磁珠的使用采用圖1中的6個簡易步驟，即可實(shí)現(xiàn)蛋白的純化。
圖1：使用磁珠/ MagBeads純化蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)流程。
步驟1：
通常采用磁珠純化的蛋白來源于細(xì)胞裂解物，此時目的蛋白與細(xì)胞表達(dá)的其他蛋白混合在一起。
第2步：
向細(xì)胞裂解物中加入適量的磁珠。此步建議使用無菌移液器吸頭。
第3步：
孵育磁珠-蛋白質(zhì)混合物。孵育時建議采用較慢但穩(wěn)定的速度（不能渦旋）,室溫下持續(xù)約2小時即可。圖1中采用的是微型離心管，但也可以使用無菌的falcon管。
第4步：
孵育完成后，所有的目的蛋白質(zhì)都應(yīng)該結(jié)合到磁珠上。注意使用過量磁珠以保證能最大量地純化目的蛋白。
第5步：
通過磁力收集磁珠，此時磁珠及目的蛋白將從剩余的裂解物中分離出來。如果采用微型離心管，可以選用我們配套的磁珠分離器。
第6步：
最后，使用無菌移液器吸頭除去未與磁珠結(jié)合的細(xì)胞裂解物。此過程中要一直施加磁力，以避免吸走磁珠。
如果您有任何問題，請隨時與我們聯(lián)系。公眾號內(nèi)回復(fù)磁珠產(chǎn)品貨號“31205"，即可獲取相關(guān)PureCube磁珠相關(guān)參數(shù)及說明書。
磁珠的優(yōu)點(diǎn)
與非磁性親和基質(zhì)相比，使用磁珠進(jìn)行蛋白質(zhì)純化更具優(yōu)勢。但與此同時，磁珠產(chǎn)品多種多樣，各自具有不同的功能和優(yōu)點(diǎn)，此簡短的總結(jié)將帶領(lǐng)您找到適合您研究的產(chǎn)品。
圖2：磁珠的圖例。
圖3：放大100倍的PureCube磁珠。
磁珠是如何純化蛋白質(zhì)的？
磁珠本身不能與蛋白質(zhì)相互作用，它必須裝載金屬離子。不同的金屬離子對his標(biāo)簽的蛋白質(zhì)有不同的親和力和特異性。（見我們的概述）。親和層析純化蛋白質(zhì)常用的是鎳-NTA配體（圖2）。將次氮基三乙酸（NTA）配體偶聯(lián)到基質(zhì)如磁珠上，然后加載金屬離子，金屬離子與帶特定標(biāo)簽的蛋白質(zhì)相互作用（例如，帶6個his標(biāo)簽的蛋白質(zhì)）。在圖4中，鎳離子被加載到磁珠上，盡管鎳離子是淺藍(lán)色的，但由于磁芯是黑色的，所以整個磁珠看起來也是黑色的。
磁芯
用于蛋白質(zhì)純化的磁珠包含由磁鐵礦制成的磁芯，其被不同材料覆蓋。磁珠通常是鐵（或鐵）磁性的，或超順磁性的。
●Ferri /鐵磁磁芯通常較大（> 30 nm）并顯示出強(qiáng)磁矩，即使在去除磁場之后，它們也保持這個磁矩，這種效應(yīng)稱為“剩磁"。強(qiáng)磁場導(dǎo)致珠子在磁場中快速分離。同時，它們有時表現(xiàn)出自磁性并且可能附著在金屬表面上。PureCube磁珠如果沒有特殊說明，都默認(rèn)是亞鐵磁性的。
●超順磁磁芯較小（5-30nm），磁矩較弱。當(dāng)去除外部磁場時，珠子失去其磁性。在磁場中分離珠子通常需要更長時間，效率也更低。但與此同時，這類磁珠適用于金屬表面。如果您需要超順磁磁珠，請隨時與我們聯(lián)系。
圖4：為了純化蛋白質(zhì)，將具有各種離子的不同配體偶聯(lián)到磁珠上。該圖顯示了Ni-NTA磁珠的例子。
圖5：PureCube磁珠的交替梯度磁強(qiáng)計（AGM）測量。
X軸：施加的磁場。Y軸：干燥的MagBead顆粒產(chǎn)生的磁矩
M.剩磁：在沒有外部磁場的情況下顆粒的殘余磁性。飽和度：粒子的最大磁矩。PureCube磁珠是亞鐵磁性，具有強(qiáng)飽和信號，但是在沒有磁場的情況下顯示出非常低的剩磁，從而防止珠子聚集。數(shù)據(jù)由德國卡爾斯魯厄理工學(xué)院的Dipl.Ing. Moritz Ebeler提供。
PureCube 磁珠的特點(diǎn)
對于標(biāo)準(zhǔn)磁珠，我們選擇以下特性以便大多數(shù)應(yīng)用能得到最佳結(jié)果。但是，如果需要，我們也可以提供一系列定制磁珠。
●標(biāo)準(zhǔn)：中等大小的珠子（20-40μm），帶有亞鐵磁性核心和瓊脂糖涂層：蛋白質(zhì)結(jié)合能力強(qiáng)，非特異性結(jié)合低，分離效率高。
●XL：可提供特殊應(yīng)用的大型或超大型磁性瓊脂糖珠（70-120μm或最大400μm），也可將您選擇的親和配體改載到其他市售磁性支持物上。
如果市場常見的磁珠不能滿足您的需求，您可以聯(lián)系我們，告知我們您實(shí)驗(yàn)所用的磁珠需要具備哪些具體功能，此前我們已經(jīng)成功為客戶定制了大量磁珠。
例如，您可能需要定制以下功能：
表面化學(xué)：磁芯可以覆蓋一系列不同的材料，提供不同的性能。
●瓊脂糖形成具有中性電荷的三維親水網(wǎng)，它與非磁性瓊脂糖類似，非常適合與蛋白質(zhì)結(jié)合（例如通過親和配體），大的相互作用表面使其具有較高的結(jié)合能力，而中性表面能減少非特異性結(jié)合。
●聚乙烯基珠具有羧酸鹽表面，它可以很粗糙（通過添加羧酸鹽刷），也可以很光滑，二者有時與蛋白質(zhì)都會有非特異性結(jié)合。它們與蛋白質(zhì)結(jié)合的表面積小于瓊脂糖覆蓋的珠子的表面積，因此它們通常采用更小的尺寸（1-2μm）以提供相同的結(jié)合能力。
●二氧化硅珠常用于核酸純化。它們在pH下帶負(fù)電荷，在蛋白質(zhì)純化中經(jīng)常有非特異性結(jié)合。
尺寸：磁珠的不同尺寸對蛋白純化的結(jié)果也有影響。
●小珠（1-10μm）：可用于純化蛋白的表面積大，但其具有較小的磁場，可對分離產(chǎn)生負(fù)面影響，尤其是從粘性溶液中純化蛋白。
●中珠（20-40μm）：提供有效分離和大的純化表面積。當(dāng)與瓊脂糖表面結(jié)合時，結(jié)合能力可以與小聚乙烯珠相同。
●大珠（70-120μm）：對于特殊應(yīng)用具有優(yōu)勢，例如當(dāng)純化方法包含磁分離和過濾時。其與瓊脂糖表面結(jié)合時，蛋白結(jié)合能力仍然很高。
