詳細介紹
產品簡介
Mach1 T1化轉克隆感受態
HB101 菌株是 E. coli K-12 菌株和 E. coli B 菌株的雜合產物(同時也是 Stbl3 的原始菌株)。該菌株
攜帶 recA13 突變,可有效抑制長片段末端重復區的重組,降低錯誤重組的概率;但由于其不含核
酸酶 endA1 突變,體內核酸酶含量較高,提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中的去蛋白液以去除
核酸酶。hsdS20 背景使 HB101 缺失內切酶系統,增強了外源 DNA 的穩定性和提取質量;此菌株具
有鏈霉素抗性;不存在 lacIqZΔM15,不可用于藍、白斑篩選。經 pUC18 質粒轉化檢測,HB101 感
受態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg DNA。
產品組成
Mach1 T1化轉克隆感受態
組分 CC96174-01 CC96174-02 CC96174-03
HB101
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:F- mcrB mrr hsdS20 (rB- mB- ) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20 (StrR) glnV44 λ-
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
Mach1 T1化轉克隆感受態
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;
5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;
3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保.高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。