詳細介紹
2× FastTaq Premix 酶
是將PCR反應中用到的FastTaq DNA聚合酶、buffer、dNTP Mixture以及穩定劑以2倍的終濃度進行混合。使用時,只需要在制品溶液中加入模板和引物便可進行PCR反應,大大簡化了操作過程,降低了PCR操作過程中污染的可能性。同Taq酶一樣,使用本品擴增得到的PCR產物的3'端也附有一個"A"堿基,因此,也可直接用于T-A克隆。針對目標PCR產物在1.5Kb以下時,本Taq酶支持1s超快PCR延伸程序(72度延伸程序僅需1s)。
2× FastTaq Premix 酶
PCR 反應體系:
* 針對不同類型的模板,所需的模板量會有不同,如基因組和質粒,等等;需要根據實際情況,添加合
適的模板量。** 退火溫度需根據引物和模板實際的 G+C 含量來作調整;針對高 GC 模板,可適當添加DMSO 至5%-10%。
1. 在冰浴上設置 PCR 反應(供參考)*:
模板: < 500 ng
2× FastTaq Premix: 25 μL
Primer 1/2: 0.2 - 1.0 μM (終濃度)
滅菌蒸餾水 Up to 50 μL
(臨時保存): 16 ℃ 保溫
2. PCR 反應參數(供參考)**:
(起始變性): 95 ℃ 5 -10 min
(解鏈): 95 ℃ 30 sec
(退火): 55 ℃ 30 sec
(延伸 30-35 循環): 2 kb/min 或1 s 延伸(超
快延伸僅適用于產物<1.5kb 時)
(終延伸): 72 ℃ 10 min
* 針對不同類型的模板,所需的模板量會有不同,如基因組和質粒,等等;需要根據實際情況,添加合
適的模板量。** 退火溫度需根據引物和模板實際的 G+C 含量來作調整;針對高 GC 模板,可適當添加
DMSO 至5%-10%。