One Step Plant Direct PCR kit直擴系列

產品簡介

ToloScript RT EasyMix for qPCR 包含新一代逆轉錄酶 ToloScript Reverse Transcriptase（RTase）和針對逆轉錄優化的

適緩沖液，進一步提高了 cDNA 合成的效率，適用于兩步法 qRT-PCR 檢測。試劑盒中的 5 × ToloScript qRT

EasyMix 含有逆轉錄反應所需的所有組分，加入模板 RNA 和水即可迅速進行反應。逆轉錄產物兼容染料法與探針

法 qPCR，可進行基因表達的高效分析。

One Step Plant Direct PCR kit直擴系列

適用范圍

高拷貝、低拷貝靶標基因轉錄水平的檢測，與 qPCR 聯用。

產品組成

組分

22105-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

5 × ToloScript qRT EasyMixa

400 μL

5 × No RT Control Mixb

One Step Plant Direct PCR kit直擴系列

保存條件

-20 ℃儲存。

質量控制

純度檢測：所有組分經檢測均無核酸外切酶、核酸內切酶及 RNase 殘留。

功能檢測：以 1 µg HeLa 細胞總 RNA 為模板進行逆轉錄反應，通過 qPCR 檢測 4 個基因的表達量，Ct 值在批次間產

品中基本相同。在 1 µg HeLa 細胞總 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，經 2-Step gDNA Erase-Out Mix 處理后加入 No

RT Control Mix，然后進行 qRT-PCR，獲得的 Ct 值>40。

實驗流程

1. 配制逆轉錄反應體系

在 RNase-free 的離心管中配置如下體系，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × ToloScript qRT EasyMix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT EasyMix for qPCR  

No RT Control 反應(可選)

No RT Control 是指不加逆轉錄酶的陰性對照反應，用于檢驗 RNA 模板中是否有 gDNA 殘留。

在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × No RT Control Mix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 進行逆轉錄反應

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

產物可立即用于 qPCR 反應，或凍存于-20℃，并在半年內使用；如需長期存放，則建議將反轉錄 cDNA 產物分裝后

凍存于-80 ℃。cDNA 應避免反復凍融。

注意事項

1. 由于 5 × ToloScript qRT EasyMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高濃度的甘油，所以在使用前請短

暫離心，并輕彈（或用移液槍輕輕吸打混勻）后，準確吸取。

2. 在 20 µL 逆轉錄反應體系中建議加入不超過 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表達量非常低，則可以

多加入 5 µg 的 Total RNA；否則，如果加入 RNA 量過高，可能會超出后續 qPCR 的線性范圍。

3. 本試劑盒制備的 cDNA 產物僅適用于 qPCR 反應，不適用于進行長片段目的基因的 PCR 擴增。

產品簡介

ToloScript RT EasyMix for qPCR 包含新一代逆轉錄酶 ToloScript Reverse Transcriptase（RTase）和針對逆轉錄優化的

適緩沖液，進一步提高了 cDNA 合成的效率，適用于兩步法 qRT-PCR 檢測。試劑盒中的 5 × ToloScript qRT

EasyMix 含有逆轉錄反應所需的所有組分，加入模板 RNA 和水即可迅速進行反應。逆轉錄產物兼容染料法與探針

法 qPCR，可進行基因表達的高效分析。

適用范圍

高拷貝、低拷貝靶標基因轉錄水平的檢測，與 qPCR 聯用。

產品組成

組分

22105-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

5 × ToloScript qRT EasyMixa

400 μL

5 × No RT Control Mixb

保存條件

-20 ℃儲存。

質量控制

純度檢測：所有組分經檢測均無核酸外切酶、核酸內切酶及 RNase 殘留。

功能檢測：以 1 µg HeLa 細胞總 RNA 為模板進行逆轉錄反應，通過 qPCR 檢測 4 個基因的表達量，Ct 值在批次間產

品中基本相同。在 1 µg HeLa 細胞總 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，經 2-Step gDNA Erase-Out Mix 處理后加入 No

RT Control Mix，然后進行 qRT-PCR，獲得的 Ct 值>40。

實驗流程

1. 配制逆轉錄反應體系

在 RNase-free 的離心管中配置如下體系，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × ToloScript qRT EasyMix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT EasyMix for qPCR  

No RT Control 反應(可選)

No RT Control 是指不加逆轉錄酶的陰性對照反應，用于檢驗 RNA 模板中是否有 gDNA 殘留。

在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × No RT Control Mix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 進行逆轉錄反應

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

產物可立即用于 qPCR 反應，或凍存于-20℃，并在半年內使用；如需長期存放，則建議將反轉錄 cDNA 產物分裝后

凍存于-80 ℃。cDNA 應避免反復凍融。

注意事項

1. 由于 5 × ToloScript qRT EasyMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高濃度的甘油，所以在使用前請短

暫離心，并輕彈（或用移液槍輕輕吸打混勻）后，準確吸取。

2. 在 20 µL 逆轉錄反應體系中建議加入不超過 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表達量非常低，則可以

多加入 5 µg 的 Total RNA；否則，如果加入 RNA 量過高，可能會超出后續 qPCR 的線性范圍。

3. 本試劑盒制備的 cDNA 產物僅適用于 qPCR 反應，不適用于進行長片段目的基因的 PCR 擴增。