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什么是解凍血清的最佳方法？

血清在 2-8°C 下解凍以防止降解；或者，它可以在室溫下解凍并定期攪拌以重新懸浮內(nèi)容物。

 

解凍的血清在加入細胞培養(yǎng)基之前應充分混合。

 

高于 37°C 的溫度會加速關(guān)鍵血清因子的降解，從而影響血清性能，在實驗室中應避免。

 

血清中的沉淀物是什么？

解凍或長時間冷凍和/或冷藏后可能會出現(xiàn)混濁和絮狀物質(zhì)。我們的經(jīng)驗表明，這些修飾不會影響血清的生物學性能。

 

一些沉淀是由纖維蛋白引起的：

我們的采集程序和快速冷凍可能會在血清中留下一些纖維蛋白原。纖維蛋白原是凝塊形成蛋白纖維蛋白的可溶性前體。纖維蛋白可能在解凍或熱滅活后出現(xiàn)。纖維蛋白不會改變血清促進細胞生長的能力。建議使用未經(jīng)處理（過濾或離心）的血清。

 

一些沉淀是由磷酸鈣引起的：

在 37°C 下長時間孵育的血清會變得混濁并可能出現(xiàn)沉積物。它們由鈣和磷組成。據(jù)我們所知，這不會改變細胞培養(yǎng)物中血清的性能。

 

血清需要加熱滅活嗎？

對于大多數(shù)細胞培養(yǎng)應用，不推薦熱滅活血清。熱滅活會降解補體蛋白，這可能會干擾免疫分析。長時間加熱血清會減少或破壞生長因子，并增加沉積物的形成，這些沉積物通常被誤認為是微生物污染。

 

血清應該如何熱滅活？

首先在 2-8°C 下解凍血清和對照血清瓶。

攪拌瓶裝血清，避免解凍過程中形成沉淀物，然后將其放入調(diào)至80°C的水浴中。

一旦控制瓶溫度達到50°C，將恒溫槽調(diào)至70°C；當瓶子溫度達到 55°C 時，將恒溫器更改為 60°C。

當血清達到 56°C 的溫度時，使用計時器（30 分鐘是注冊時間）并將水浴的恒溫器更改為 56°C。在這 30 分鐘內(nèi)，定期檢查溫度并通過調(diào)節(jié)恒溫器、添加一些冷水以及是否降低蓋子來保持溫度穩(wěn)定。每 5 到 10 分鐘攪拌一次血清。

將血清在室溫下保持 30 分鐘，然后將血清冷凍在 -20°C。

注：

。攪拌對于良好的血清質(zhì)量至關(guān)重要。如果血清沒有正確混合，會出現(xiàn)鹽、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的沉淀物，并形成結(jié)晶和絮凝沉積物。這些沉積物對細胞培養(yǎng)無毒，但會影響血清外觀和稠度。

. 長時間加熱血清會破壞生長促進劑，這也會導致沉積物形成。

 

血清在 +2 至 +8°C 之間可以儲存多長時間？

血清可在 +2 至 +8°C 之間儲存長達 8 周而不會降低其性能 (*)。

Biowest 的內(nèi)部研究表明，在 26 周的儲存期間（+2 至 +8°C），血清促進細胞生長的能力沒有顯著改變。

(*) Art to Science，第 19 卷，第 2 期，“冷藏溫度 (2-8°C) 下的血清穩(wěn)定性"。

 

血清的推薦儲存溫度是多少？

血清應冷凍保存并避光。推薦的存儲溫度為 -10°C 至 -40°C。在低于 -40°C 的溫度下，瓶子可能會變脆，增加破裂的風險。

 

胰蛋白酶產(chǎn)品的顏色并不總是相同是否正常？

一些胰蛋白酶制劑含有酚紅。由于產(chǎn)品與干冰一起運輸，因此 包裝中可能會積聚大量 CO 2。這種 CO 2 可能會進入溶液并稍微降低 pH 值，呈現(xiàn)橙色（pH 值 6.5 左右）與粉紅色（pH 值 7.3 左右）的顏色。該溶液，如果橙色（酸性）仍然可以按原樣使用，或者可以添加氫氧化鈉來調(diào)節(jié) pH 值。

 

四環(huán)素對 FBS 在細胞生物學中的意義

四環(huán)素是一類廣譜抗生素，通過阻斷氨酰基-tRNA 與核糖體的結(jié)合來抑制細菌蛋白質(zhì)合成。由于對抗生素抗性微生物發(fā)展的日益關(guān)注，歐盟在 1970 年代初期禁止使用四環(huán)素作為生長促進劑。然而，在世界其他地方，四環(huán)素仍然是家畜常用的抗生素之一。自 1992 年以來，四環(huán)素控制的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)，或通常稱為“Tet-Off"和“Tet-On"系統(tǒng)，已被用于在全球?qū)嶒炇沂褂玫募毎的Ｐ椭姓T導哺乳動物表達。在 Tet-Off 系統(tǒng)中，如果存在四環(huán)素，則基因表達會被沉默，并且通過從培養(yǎng)基中去除四環(huán)素來誘導表達。反之亦然，

 

兩種系統(tǒng)對 FBS 中發(fā)現(xiàn)的甚至少量四環(huán)素都非常敏感。因此，如果研究人員使用這些工具來控制他的細胞培養(yǎng)模型中的基因表達，那么供應*不含四環(huán)素的 FBS 就非常重要。

 

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為什么只選擇AB血型？

來自 AB 型供體的人血清缺乏針對 A 和 B 血型抗原的抗體。因此，它最大限度地減少了免疫反應性，因為大多數(shù)人類血清使用者都在處理來自免疫系統(tǒng)的細胞。

 

為什么人類血清只存在于男性供體中？

懷孕的婦女可能會產(chǎn)生針對父親細胞和/或胎兒細胞上攜帶的主要組織相容性類 (MHC) 抗原的抗體。男性捐贈者不存在此類風險。

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