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cytoskeleton-乙酰賴氨酸工具 介紹
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乙酰賴氨酸工具
概述
翻譯后乙酰化發生在賴氨酸殘基的ε-氨基上，作為一種可逆且高度動態的PTM，已知其是多種細胞事件的關鍵調節因子，包括染色質結構、轉錄、代謝、信號轉導和細胞骨架調節。
主要功能
首乙酰賴氨酸研究者的優化試劑盒
分析細胞或組織樣品中內源性或轉染蛋白的乙酰化
最完整的乙酰化蛋白質圖譜
化學計量分析帶來更深入的機理見解
查看備受關注的Signal™Seeker工具箱的新增內容（如下）
新格式-信號導引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒（目錄號BK163-S.15測定）
新格式-信號導引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒（目錄號BK163，30個測定）
新-信號導引頭乙酰賴氨酸檢測試劑盒-AAC03（目錄號BK164，30個測定）
新格式-乙酰賴氨酸親和珠（AAC04
乙酰賴氨酸抗體小鼠單克隆抗體
乙酰賴氨酸小鼠單克隆抗體
抗乙酰賴氨酸抗體是一種泛乙酰賴氨酸酯小鼠單克隆抗體，是Signal Seeker™產品線的一部分。抗乙酰賴氨酸抗體識別通過賴氨酸殘基的ε-胺基團上的乙酰化進行翻譯后修飾的蛋白質，所述賴氨酸殘余基出現在所有蛋白質的30-50%上，特別是組蛋白、p53、微管蛋白和肌球蛋白。使用乙酰化蛋白的專有混合物來產生高度強健的抗體，該抗體已被證明在IP、WB、ChIP和IF應用中識別廣泛的乙酰化蛋白。這種抗乙酰賴氨酸抗體與其他市售抗體相比具有許多優點，如下所示。
已驗證的應用程序
使用乙酰賴氨酸抗體的蛋白質印跡
細胞骨架的抗乙酰賴氨酸抗體類別#AAC01識別0.005ng化學乙酰化的BSA，并且在靈敏度上與其他市售抗體相當。與其他抗乙酰賴氨酸抗體不同，該抗體與非乙酰化BSA沒有顯示出交叉反應性。要查看完整的蛋白質印跡比較，請參閱優化方案或產品數據表。
乙酰賴氨酸蛋白質印跡
使用乙酰賴氨酸抗體的免疫沉淀
將AAC01對IP組蛋白的能力與其他市售抗體進行比較。Cytoskeley的抗乙酰賴氨酸抗體為IP應用提供了明顯的優勢。每個試管足以進行大約20次IP測定。要查看完整的免疫沉淀比較，請參閱優化方案或產品數據表。
乙酰賴氨酸免疫沉淀
使用乙酰賴氨酸抗體的免疫熒光
將未經處理（頂部）或用TSA（5mM，12小時）處理（底部）的人表皮樣癌A431細胞按本方法所述染色。乙酰化的細胞質和細胞核蛋白在綠色熒光中可見。注意，與未處理的對照相比，TSA處理的樣品中乙酰化微管網絡清晰可見。熒光核強度表明核中乙酰化蛋白的豐度很高。要查看完整的免疫熒光方案，請參閱優化方案或產品數據表。
乙酰賴氨酸IF
使用乙酰賴氨酸抗體的ChIP
染色質由未處理或TSA處理（5mM，4小時）的A431細胞制備。簡言之，用1%甲醛固定細胞10分鐘，并通過使用抗乙酰基抗體（1:100稀釋）免疫沉淀酶切染色單體。通過引物對擴增管家基因GAPDH的啟動子區，并通過2%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產物。要查看推薦的ChIP協議，請參閱優化協議或產品數據表。
蛋白質乙酰化背景
蛋白質的乙酰化可以作為共翻譯或翻譯后修飾（PTM）發生（1）。共翻譯乙酰化發生在大約85%的哺乳動物蛋白質的N-末端，它是不可逆的，被認為在蛋白質的穩定性、定位和合成中很重要（1）。翻譯后乙酰化發生在賴氨酸殘基的ε氨基上，作為一種可逆且高度動態的PTM，已知其是多種細胞事件的關鍵調節因子，包括染色質結構、轉錄、代謝、信號轉導和細胞骨架調節（2-3）。迄今為止，已有4000多種蛋白質被鑒定為PTM乙酰化的靶標，這與細胞前體中的磷酸化相當（3）。抗體AAC01檢測乙酰賴氨酸PTMs。
乙酰賴氨酸親和珠-AAC03
乙酰賴氨酸親和珠
Cytoskeley提供兩種類型的乙酰賴氨酸親和珠，Cat#AAC02珠和Cat#AAC03珠。這兩種試劑都由與G蛋白珠共價連接的小鼠抗乙酰賴氨酸抗體組成，并且都富集了廣泛的乙酰化蛋白。AAC02珠粒和AAC03珠粒可以組合以提供更廣泛的乙酰化蛋白質富集譜（Cat#AAC04珠粒是AAC02珠與AAC03珠的1:1組合）。
與AAC02珠相比，AAC03珠具有重疊但獨的特異性，在檢查特定靶蛋白時可能優于AAC02珠，請參閱詳細方法和驗證應用程序以獲取示例。由于乙酰化通常只占總靶蛋白的很小百分比，因此使用優化的試劑對成功至關重要。當檢查新的感興趣蛋白質（POI）的乙酰化狀態時，建議分別嘗試AAC03珠和AAC02珠，以確定哪種試劑適合y
已驗證的應用程序
應用1：檢測目標POI中的乙酰化變化
AAC03珠已被證明是乙酰化EGFR和RhoGDI靶標POI免疫沉淀的優良試劑（圖1）。在HDAC抑制劑存在的情況下，AAC03珠-IP顯示EGFR和RhoGDI的乙酰化分別增強11.3倍和2.5倍。而AAC02 Bead分別表現出較弱的8倍和1.1倍的增長。
圖1圖例：AAC03珠粒和AAC02珠粒（50µl珠漿）和1:1混合物（各25µl）AAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細胞的乙酰化蛋白IP 6小時。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進行蛋白質印跡分析，并使用LiCor-Empiria軟件對信號進行定量。還進行IP測定，并對小鼠IgG對照珠的信號進行定量（印跡未顯示）。每個IP使用1 mg裂解物。
應用2：總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀
AAC03珠顯示出強大的總乙酰基IP圖譜，與AAC02珠具有重疊但特異性圖譜。AAC03珠可以單獨使用，也可以與AAC02珠組合使用來研究乙酰基組。
圖2圖例：使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠（50µl珠漿）對用脫乙酰酶抑制劑[TSA（1µM）和煙胺（1mM）]處理（+）或未處理（-）的Cos-7細胞的乙酰化蛋白進行IP處理6小時。用AAC03-HRP抗體（1:3000）洗脫并通過蛋白質印跡分析富集的乙酰化蛋白的總圖譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結合的對照（Cat#CIG02）。每次IP測定使用1 mg Cos-7裂解物
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