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新生兒心肌細胞分離

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貨號：nc-6031

科學家的正確策略

 

大多數有關新生大鼠或小鼠心肌細胞分離的方法不僅耗時費力，而且還導致細胞活力低下，這是研究人員最關心的問題。

需要更多細胞來研究細胞生長，分化和死亡的細胞和分子機制的科學家將發現，其實驗無法獲得低產量的細胞。

高性能系統

使用最新更新的心肌細胞分離系統，您將*消除所有這些問題，并在一小時內獲得最健康，產量最高的新生兒心肌細胞。

新生大鼠或小鼠心肌細胞分離系統無風險，保證令人滿意。

產品

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  Neomyt套件        nc-6031        6個Rxns     $ 415

  SureCoat（用于涂布培養板）    sc-9035        500毫升    

  NS培養基（含血清）         m-8031        500毫升    

  NW培養基（無血清）

  m-8032        500毫升      

    * 1個rxn可以處理5至35個新生大鼠心臟，20至80個小鼠心臟

  * Neomyt試劑盒中不包含NS培養基和NW培養基

基于miRNA的基因敲低

 

 

 

 

基于Cellutron miRNA的基因敲除（KD）具有以下優點：

1.高度序列特異性，與靶基因具有100％的同源性

2.比其他基因敲除方法（例如siRNA）更有效

3.允許將兩個或多個miRNA結構克隆到同一表達盒中，以進行單個或多個靶標敲除。

4.具有強大的Pol II啟動子，可在多種細胞類型中高效表達miRNA。5

.產生穩定的基因敲除細胞系

6. GFP或RFP報告基因的表達，用于監測轉染效率

7.細胞毒性很小或沒有

對照敲低載體：不   包含miRNA

miRNA敲低載體：  包含一個miRNA靶標或兩個miRNA靶標

誘導表達載體系統

 

 

 

 

 

Cellutron用Cre-Loxp技術開發了一種新型的誘導表達系統，并提供了調節轉基因表達的能力。該系統包含兩個具有強大CAG啟動子的表達載體，用于高效基因表達。pEGFP / RFP-miRNA-BL和pEGFP / RFP-T2A-GOI-BL是EGFP和3X終止序列的表達載體，兩側是兩個loxP位點，其后是一個順反子序列，用于表達RFP和miRNA或編碼蛋白質的轉基因。另外，在miRNA和編碼蛋白質的轉基因的表達盒的下游克隆了殺稻瘟菌素（BL）表達盒（用于在哺乳動物細胞中進行藥物選擇）。與可誘導表達載體共轉染需要pCreER-IRES-Puro。

 

 

 

共轉染后，系統最初僅表達EGFP，這是一種報告蛋白，可方便地監測轉染效率。可以在體外和體內添加4-OHT，以激活Cre重組酶的條件活性形式，從而導致miRNA或編碼蛋白質的轉基因的高水平和受調控的表達。

誘導表達系統使您能夠：

1.在分裂和非分裂細胞（包括成體和胚胎干細胞以及iPS細胞）中高效轉染。

2.在體內和體外條件表達miRNA或編碼蛋白質的轉基因。

3.生成穩定的細胞系，以長期表達miRNA或編碼蛋白質的轉基因。

該系統最初表達EGFP，經過4-OHT處理后，有條件活性形式的Cre重組酶被激活，并通過兩個loxP位點之間的交換催化位點特異性重組，從而導致“固定的” EGFP和終止序列被切除。允許表達RFP和miRNA或編碼蛋白質的轉基因。

OHT（4-hydroxytamoxifen）處理miRNA表達

對于體內注射，將4OHT（Sigma，St.Louis，MO）以20 mg / ml的濃度溶于乙醇，然后用9體積的玉米油（Sigma）稀釋。用26口徑針將稀釋的4OHT（2 mg / ml）腹腔注射（每只動物500 µl）注入動物體內。

對于培養的細胞，將在乙醇中稀釋的4OHT（0.39 mg / ml）直接添加到細胞培養基中（最終濃度：1-2 µM = 0.39-0.78 µg / ml）。

 

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