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隨著生命科學的發展,生化試劑已發展成為化學試劑的一大類,有商品10000多種。中國銷售的生化試劑品種有2500多種。目前在國內,生化試劑涵蓋肝功、腎功、血脂、心肌、胰腺、特殊蛋白等,能夠滿足終端用戶的各種生化檢測需求。
生化試劑的概念
生化試劑是從生物體中提取的或由化學合成的生物體的基本成分,用于生物成分的分析鑒定及生物制品的制造。生化試劑主要是針對血常規、尿常規、肝功能、腎功能、胰腺、糖尿等疾病的診斷試劑。生化診斷是最早實現自動化的檢測手段,也是目前常用的體外診斷方法之一。
常見的生化試劑種類
1、蛋白酶K
能水解消化蛋白質,特別是與DNA結合的組蛋白。再尿素和SDS中穩定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2、SDS
十二烷基硫酸鈉溶解細胞膜上的脂類與蛋白質,因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜,并解離細胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質結合而沉淀。
3、IPTG
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等. IPTG和乳糖的結構相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結合,使阻遏蛋白的空間構像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉錄合成利用乳糖的酶類。
與乳糖不同的是,IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用ji強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定。
4、MOPS
一種緩沖液,有抑制RNA酶的作用,一般和甲醛(用于變形RNA)用于RNA變性電泳。
5、鹽酸胍
鹽酸胍等可使蛋白質結構中的氫鍵發生斷裂,這增加了非極性分子包括氨基酸側鏈的溶解度,減少了疏水相互作用。
6、吖啶橙
是一種熒光色素,與細胞中DNA和RNA結合量存在差別,可發出不同顏色的熒光,與DNA結合量少發綠色熒光,與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,能透過細胞膜,使核DNA和RNA染色。
在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。
吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,因EB只染死細胞使之產生桔黃色熒光,由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌于兩個相鄰的堿基對之間,這樣在DNA復制過程中,會使DNA鏈增加或缺失一個堿基,造成移碼突變。吖啶橙染液有毒,操作時要戴手套,需避光。
7、DMSO
二甲基亞砜實驗室常用于作液體層析溶劑,同時用作測試物質紫外消光值上時用作參照物,能溶于所有烷烴和烯烴。
8、TRICINE
N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸, 常見的電泳系統是Tris-甘氨酸系統;Tris-Tricine電泳則用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的電泳,能夠獲得較好的分離效果. 可以用前者代替。
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