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  • 生物因素對微生物的影響(抗菌譜試驗)

    實驗原理許多微生物在其生命活動過程中能產生某種特殊的代謝產物,具有選擇性地抑制或殺死其他微生物的作用,例如抗生素。不同抗生素的抗菌譜是不同的,某些抗生素只對少數細菌有抗菌作用,例如青霉素一般只對革蘭氏陽性菌有抗菌作用,多粘菌素只對革蘭氏陰性菌有作用,這類抗生素稱為窄譜抗生素;而另一些抗生素則對多種細菌有作用,例如四環素、土霉素對許多革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都有作用,這類抗生素稱為廣譜抗生素。如果將產生某種抗生素的菌劃直線接種在豆芽汁葡萄糖瓊脂培養基平板上,經培養后,就會長出一條菌帶,并產生某種
  • Omega質粒小量提取流程

    實驗試劑1.使用前,將RNaseA全部加入SolutionI中并于4度保存。2.按下表用無水乙醇稀釋DNAWashBuffer,并于室溫保存。D6948-00B:加入8ml無水乙醇D6948-01B:加入80ml無水乙醇D6848-02B:加入80ml無水乙醇實驗步驟1.取1.5-5ml菌液10,000xg室溫離心1min收集菌體沉淀;2.小心去除上清液,加250ulSolutionI/RNase,渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體。3.加250ulSolutionⅡ,來回顛倒4-6次輕柔混勻,得到
  • 細菌中蛋白質的提取與純化技術

    實驗試劑采用T7?TagAffinityPurificationKitT7?Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液:4.29mMNa2HPO4,1.47mMKH2PO4,2.7mMKCl,0.137mMNaCl,1%吐溫-20,pH7.3洗脫緩沖液:0.1M檸檬酸,pH2.2.中和緩沖液:2MTris,pH10.4。PEG20000。實驗步驟1.100ml含重組表達質粒的菌體誘導后,離心5000g×5min,棄上清,收獲菌體,用10ml預冷的B/W緩沖液重懸。2.重懸液于冰上超聲處理,直至樣品不再粘稠,4
  • 從瓊脂糖凝膠(Agaros gel)中回收DNA片段

    實驗原理限制性內切酶切割后的DNA片斷經過電泳后,按分子量大小被分開,排列在瓊脂糖凝膠中,可以將特定的某條DNA帶所在的凝膠切下來,加熱或用特殊的試劑熔解凝膠,使DNA溶回到溶液中,再經過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的DNA酶切片段。實驗試劑1.電泳緩沖液2.熒光染料3.電泳級瓊脂糖粉4.10′加樣緩沖液5.DNA分子量標準(DL2000)6.DNA凝膠回收試劑盒實驗設備1.旋渦混合器2.微量移液取樣器3.移液器吸頭4.1.5ml微量離心管5.雙面微量離心管架6.臺式離心機7.瓊脂糖凝膠電泳系統8.
  • 蛋白質濃度測定(雙縮脲法)

    實驗原理測定蛋白質的定量方法有很多,目前常用的有凱氏定氮法;比色法主要包括雙縮脲法、Folin-酚試劑法及染料結合法;紫外分光光度法等雙縮脲(Biuret)法:在堿性溶液中,雙縮脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)與二價銅離子作用形成紫紅色的絡合物,這一反應稱雙縮脲反應。凡分子中含二個或二個以上酰胺基(—CO—NH2),或與此相似的基團[如—CH2—NH2,—CS—NH2,—C(NH)NH2]的任何化合物,無論這類基團直接相連還是通過一個碳或氮原子間接相連,均可發生上述反應。蛋白質分子含有眾多
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    實驗原理我們知道微生物都具有生長旺、繁殖快的特點,單細胞微生物如細菌、酵母菌的個體細胞的增大即細胞物質的增加是有限度的,細胞長大到一定程度就開始分裂繁殖,菌體數量增多。細菌旺盛生長時幾十分鐘就可繁殖一代。因此他們的生長往往是通過繁殖表現出來的,本質上是以群體細胞數目增加為生長標志。絲狀微生物如放線菌、霉菌的生長主要表現為菌絲的伸長和分枝,他們相互纏繞,很難分清個體與個體之間的界限,所以通常以菌絲的重量增長(細胞質量的增加)或菌絲生長速度間接來衡量生長狀況。目前測定微生物數量的方法有直接法和間接法
  • EMSA凝膠遷移

    實驗原理凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術zui初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的D
  • LB培養基的配制

    實驗步驟1.LB培養基Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g加水至1000mL(pH7.2,固體培養基加1.8%瓊脂粉)。2.LB抗性篩選培養基待滅菌后的LB固體培養基溫度降至50℃左右,加入抗生素儲存液至終濃度50μg/mL,即每毫升培養基加抗生素儲存液1μL,搖勻后,倒平板。液體LB抗性篩選培養基,在*冷卻后加入抗生素,加入的量與固體培養基相同。3.LB/Amp/IPTG/X-gal培養基在含100μg/mLAmp的LB瓊脂平板上加入40μLX-gal貯存液和40μ
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