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標簽： 神經 膠質
神經膠質細胞培養可以：（1）獲得神經膠質細胞；（2）用于神經膠質細胞電生理特性，如膜電位、去極化等；（3）用于免疫應答研究。
實驗方法
- 酶消化法
- 胰蛋白酶消化法
| 實驗材料 | 大鼠 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | CMF-Hanks液 胰蛋白酶 DMEM F12 |
| 儀器、耗材 | 水浴鍋 培養箱 |
| 實驗步驟 | 一、原代培養 2. 解剖顯微鏡下，剝離腦膜，切除大腦髓質部分。 3. 將大腦皮質在無Ca2+、Mg2+Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。 4. 室溫下靜置10 min。 5. 在37℃水浴箱中用0.125%的胰蛋白酶(用CMF-Hanks液配制)消化30 min。 6. 加入少許含20%血清的DMEM/F12(DMEM與F12為1:1)混合培養液(下同)，用吸管稍加吹打至胰酶液與培養液混勻。離心5 min(1 000 r/min)。 7. 吸去上清含酶液，重新加入含血清培養液，用吸管反復吹打至組織塊消散為止。制成細胞懸液(暫稱初細胞懸液)。 8. 將初細胞懸液接種到玻璃瓶(或培養皿)中，于37℃、5%CO2培養箱中孵育30 min。 9. 翻轉培養瓶,吸出瓶中的細胞懸液。用孔徑為75μm的不銹鋼網過濾。 10. 將濾過液離心10 min(1 000 r/min)，濃縮成約3ml的細胞懸液(暫稱為次細胞懸液)。 11. 將次細胞懸液種植到預先涂布有多聚賴氨酸的培養瓶中。接種的細胞密度約1×104個/cm2。 12. 置CO2培養箱中培養3-5h,再補加足夠的培養液,繼續培養9-14 h。培養液顏色略微變黃時換液。
1. 吸取舊培養液用CMF-Hanks液洗滌2次。 2.加入少許0.125%的胰蛋白液消化15 min。以有血清培養液終止胰酶活性。 3.稍事手動搖晃,倒掉含酶液。加入有血清培養液。 4.用吸管反復吹打使細胞從培養瓶壁脫落。收集細胞懸液,離心10 min(1 000 r/min)。棄上清液，給細胞沉淀物再加入培養液制成細胞懸液。 5.重復原代培養時8-10步。 6.將細胞懸液按0.5×105個/cm2的密度種植在經鼠尾膠原包被的培養瓶中。 7.送入CO2培養箱中培養3-5 h，再加足夠的培養液,繼續培養。
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