国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

上海北諾生物科技有限公司

中級會員·13年

聯系電話

15800960770

您現在的位置: 首頁> 技術文章 > DNA實驗技術:限制性內切酶消化DNA實驗
中級會員·13年
人:
周經理 劉經理
話:
021-57730393
機:
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區宜山路520號中華門大廈18樓D座
化:
www.bnbiotech.com
址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機商鋪

DNA實驗技術:限制性內切酶消化DNA實驗

2013-7-27  閱讀(2156)

分享:

標簽: 限制性內切酶 消化 DNA

影響限制性內切酶反應的因素很多。DNA制品中的污染均能抑制酶切活性。這種抑制可通過增加酶作用單位數、增大反應體枳以稀釋可能的抑制劑或延長反應時間來加以克服。

實驗方法

  • 單酶單DNA樣品消化
  • 消化多個DNA
  • 部分消化

實驗方法原理

進行限制酶切割反應只需簡單地將酶和DNA樣品放在合適的反應緩沖液溫育,其中DNA和酶的量、緩沖液的離子強度、溫育溫度和時間都依具體的反應而改變。

實驗材料

DNA

試劑、試劑盒

TE 酶切緩沖液 EDTA

儀器、耗材

電泳儀

實驗步驟

1.  混合下列溶液于一個無菌的微量離心管中


(1)x μl  DNA

(2)2 μl  10×酶切緩沖液

(3)18-x μl  H2O


(4)20 μl 的反應體積可以方便地用于聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳分析。

(5)只要反應混合物中其他成分的比例保持一定,可增減待切割DNA的量和反應條件。

 

2.  加入限制性內切酶(1~5 U/μg DNA)在推薦的溫度溫育1 h (—般是37℃)。

3.  理論上,1 U 限制性內切酶在推薦的反應條件下,60 min 內可*消化1 μg 純化的樣品。

4.  酶的體積應低于反應總體積的1/10,因為酶液中的可以干擾反應。

 

5.  加入5 μl 電泳加樣緩沖液終止反應,進行瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。


6.  反應也可通過加入0.5 μl 0.5 mol/l EDTA(終濃度為12. 5 mol/l) 以螯合鎂離于而終止。

7.  很多酶再65℃溫育10 min 可被不可逆滅活,有些不能在65℃熱失活的酶在75℃溫育15 min 也能失活。

8.  如果酶對熱具*抗性,可遍過酚抽提和乙醇沉淀或通過硅基質懸浮法來純化DNA。

 

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
產品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言
主站蜘蛛池模板: 呼和浩特市| 克什克腾旗| 玉屏| 永靖县| 安泽县| 庄河市| 阳山县| 泊头市| 海林市| 望奎县| 平利县| 武邑县| 新野县| 偃师市| 蚌埠市| 运城市| 浠水县| 齐齐哈尔市| 玉溪市| 庄浪县| 青川县| 甘孜县| 翼城县| 乌兰浩特市| 繁峙县| 保康县| 温泉县| 金湖县| 通许县| 东至县| 贵定县| 合作市| 隆昌县| 巨野县| 修文县| 喀喇沁旗| 福鼎市| 广灵县| 彭州市| 克山县| 绥阳县|