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標簽: 限制性內切酶 消化 DNA
影響限制性內切酶反應的因素很多。DNA制品中的污染均能抑制酶切活性。這種抑制可通過增加酶作用單位數、增大反應體枳以稀釋可能的抑制劑或延長反應時間來加以克服。
實驗方法
- 單酶單DNA樣品消化
- 消化多個DNA
- 部分消化
實驗方法原理 | 進行限制酶切割反應只需簡單地將酶和DNA樣品放在合適的反應緩沖液溫育,其中DNA和酶的量、緩沖液的離子強度、溫育溫度和時間都依具體的反應而改變。 |
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實驗材料 | DNA |
試劑、試劑盒 | TE 酶切緩沖液 EDTA |
儀器、耗材 | 電泳儀 |
實驗步驟 | 1. 混合下列溶液于一個無菌的微量離心管中
2. 加入限制性內切酶(1~5 U/μg DNA)在推薦的溫度溫育1 h (—般是37℃)。
5. 加入5 μl 電泳加樣緩沖液終止反應,進行瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。
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