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【簡單介紹】
| 品牌 | BIOHUB | 規格 | mg |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 現貨 |
【詳細說明】
以下方案是鉀鹽和鈉鹽制備的一個例子，它可以適用于大多數細胞類型和體內動物用途。
1.用于體外生物發光圖像測定的實施方案
1.1在無菌水中制備100mM（100-200X）熒光素原液。混合均勻。立即使用，或單獨使用等分試樣，并儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。
1.2在預熱的組織培養基中制備0.5-1mM D-熒光素的工作溶液。
1.3從培養細胞中分離培養基。
1.4將熒光素工作溶液加入細胞中，并在成像前將細胞在37°C孵育5-10分鐘。
2.用于體內生物發光圖像測定的實施方案
2.1在DPBS中制備15mg / mL熒光素儲備溶液，不含Mg2+和Ca2+。 混合均勻。
2.2過濾器通過0.2μm過濾器過濾滅菌溶液。立即使用，或單獨使用等分試樣，并儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。
2.3在動物體重150mg / kg（或10μL/ g熒光素儲備溶液）成像10-15分鐘腹膜內（i.p.）注射熒光素。
注意：應對每種動物模型進行熒光素的動力學研究，以確定峰值信號時間。
3.熒光素報告分析分子測定的實施方案
3.1在無菌水中制備100mM熒光素儲備溶液。 立即使用，或單獨使用等分試樣，并儲存在-20°C，避免凍融循環，避免暴露在光線下。
3.2制備1mM D-熒光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine緩沖液，pH7.8。
3.3將5-10μl細胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解試劑或緩沖液作為空白。
3.4根據制造商的說明，使用熒光素工作溶液的普利光度計。
3.5注入200μl熒光素工作溶液，無延遲，10秒積分時間。
D-熒光素鉀鹽溶于無菌水和緩沖液，溶解度可高達25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時間對其保存過程中的穩定性非常重要。當溶液的pH<6.5（發生水解作用）或>7.5（發生消旋化作用，D型轉化為L型）的情況下，D-熒光素鉀鹽相對不穩定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。儲備溶液可以在不含ATP的水中制備，并在-20°C下避光儲存。必須用適當的堿中和游離酸溶解。
D-熒光素可與任何現有的文獻或ATP分析系統一起使用。
如果檢測ATP，請戴上手套并使用無ATP容器，盡量減少所有可能的ATP污染源。僅使用無菌無ATP水和試劑。使用高壓滅菌水進行所有試劑制備。
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