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當(dāng)前位置:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司>>技術(shù)文章>>如何有效去除內(nèi)毒素?
目前,解決如何去除內(nèi)毒素的問題刻不容緩,那如何有效去除內(nèi)毒素呢?
首先,在藥品制劑及基因工程等產(chǎn)品的生產(chǎn)過程去除內(nèi)毒素包含兩方面的內(nèi)容:在藥品制造過程中或在基因工程產(chǎn)品生產(chǎn)過程中所需的各類藥品以及水等一切儀器和試劑都不能有內(nèi)毒素存在,甚至要檢查每一個環(huán)節(jié)中的個別藥品試劑的內(nèi)毒素含量,若發(fā)現(xiàn)有超量或較大量內(nèi)毒素存在時,必須要把內(nèi)毒素去除,然后再進(jìn)行下一步制造程序。去除內(nèi)毒素的方法要根據(jù)各類藥物的相對分子質(zhì)量等應(yīng)用各種相應(yīng)有效的方法予以去除。選擇去除內(nèi)毒素的方法十分重要。
總之,要求研究既能有效去除內(nèi)毒素又能最大限度地保持生物大分子活性的方法是十分重要的。一般需根據(jù)具體要求選擇去除內(nèi)毒素的方法,例如基因工程產(chǎn)品的純化即主要采用各種分析技術(shù)如離子交換、親和層析、分子篩等有效去除內(nèi)毒素。
離子交換是利用樣液中各種物質(zhì)在同一環(huán)境中所帶電荷的不同而加以交換分離的,當(dāng)pH值>2時內(nèi)毒素帶負(fù)電荷,這是離子交換法去除內(nèi)毒素的基礎(chǔ)。應(yīng)用層析法從白蛋白中去除內(nèi)毒素的工藝主要是采用DEAE-SepharoseF介質(zhì),即將被內(nèi)毒素污染的白蛋白上柱,使白蛋白和大部分內(nèi)毒素結(jié)合于介質(zhì)上,先用水清洗清除少部分不結(jié)合的內(nèi)毒素,然后用特殊洗脫液選擇性洗脫白蛋白,此洗脫液對內(nèi)毒素?zé)o作用,因此90%的內(nèi)毒素仍結(jié)合在柱上,最后用NaOH將柱清洗干凈。用此法每批可以處理20kg白蛋白,可清除內(nèi)毒素含量達(dá)20μg/L。
其次,即使生產(chǎn)中采取了有效的工藝和嚴(yán)格的預(yù)防措施,仍有可能在藥品制造及分裝中污染內(nèi)毒素,如何處理已被污染的半成品是比較棘手的問題。
最后,人們要解決的是臨床上的內(nèi)毒素血癥問題,即怎樣有效地把血液中的內(nèi)毒素去除。目前較為有效的處理方法是采用親和層析技術(shù),即將內(nèi)毒素底物LAL或多黏菌素B(PMB)以及其他有效的、特異性較強(qiáng)的物質(zhì)偶聯(lián)于載體(CNB-Scellulose或中孔纖維)上,用介質(zhì)的特異性吸附內(nèi)毒素,從而使蛋白通過,把內(nèi)毒素吸附住。
Kutg介紹了PMB處理凝膠的制作,他利用PMB凝膠柱從含1~10mg/L內(nèi)毒素的溶液中將內(nèi)毒素充分除凈,但未能明確介質(zhì)的吸附量。美國Sterogene生物分離公司的Acticlean Etox凝膠的最大內(nèi)毒素結(jié)合量在血清中為2000EU/ml,在水中為20000EU/ml,用這種膠處理被污染的含白蛋白的干擾素,可吸附內(nèi)毒素量為1700EU/ml,去除內(nèi)毒素效果較好,但活性有一定損失。
目前需要解決的是蛋白與內(nèi)毒素結(jié)合的問題,如果內(nèi)毒素在蛋白溶液中以游離形式存在,上述方法是有效的;如果內(nèi)毒素與目標(biāo)蛋白結(jié)合在一起,則Thomas報道的選用透析的表面活性劑辛烷-B-D-吡喃甙葡糖可使內(nèi)毒素與蛋白解離,之后再使用PMB-Sepharose 4B親和層析法,用這種方法處理已被內(nèi)毒素污染的牛過氧化物酶是有一定效果的。
國內(nèi)張順財?shù)葓蟮缿?yīng)用多黏菌素B脂親和層析法清除體液中的內(nèi)毒素的結(jié)果表明:5ml多黏菌素B親和層析柱吸附內(nèi)毒素的總量為450μg,應(yīng)用此法對血清及腹水中的內(nèi)毒素有明顯的吸附作用,而血清中的有效成分則無明顯改變,且柱的復(fù)活率可達(dá)85%。
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