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當(dāng)前位置:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)菌外膜的組成之蛋白質(zhì)的介紹
細(xì)菌外膜分子組成中的一半為蛋白質(zhì),外膜中所含的蛋白質(zhì)種類較多,但僅存在幾種稱為主要蛋白(major proteins)的分子成為外膜蛋白的主要成分,這類蛋白質(zhì)包括透道蛋白(porins)和外膜A蛋白(Outer membrane protein A,Omp A),這兩類蛋白質(zhì)的分子量均為35000d左右。此外外膜中還含有胞壁脂蛋白,但其分子量要小得多(7200d)。如果細(xì)菌培養(yǎng)環(huán)境改變,則主要蛋白的組成可發(fā)生變化,如當(dāng)腸桿菌在富含麥芽糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí),LamB蛋白(λ噬菌體的受體)便成為一種主要蛋白,而當(dāng)細(xì)菌在無鐵條件下培養(yǎng)時(shí),則參與攝取鐵螯合物的蛋白便成為主要蛋白。
1.脂蛋白(lipoprotein):是細(xì)菌外膜的一種結(jié)構(gòu)蛋白,分子量較小,約7200d,但細(xì)菌含有的量較大(7×105分子/細(xì)胞)。大約其中的1 /3稱為結(jié)合脂蛋白,它通過C-末端賴氨酸的-NH2殘基而與肽聚糖的胞壁酸共價(jià)交聯(lián)。其余2/3為游離型脂蛋白。脂蛋白N-末端半胱氨酸殘基的-SH基團(tuán)被二甘油基所取代,而其-NH2基團(tuán)由一個(gè)脂肪酸所酰胺化。脂蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)已闡明,二級(jí)結(jié)構(gòu)屬于α-螺旋結(jié)構(gòu)。脂蛋白分子間可發(fā)生交聯(lián),故而可形成寡聚體。這一蛋白的親水性順序暴露于外膜的外表面,而脂質(zhì)部分通過疏水鏈鑲嵌于外膜的磷脂分子中。
脂蛋白結(jié)構(gòu)基因突變的菌株雖然能允許小分子量親水性分子通過外膜;但這種突變株的細(xì)胞壁不穩(wěn)定,外膜成分可以小泡形式釋放出來。因而脂蛋白除作為一種結(jié)構(gòu)蛋白外,還起到穩(wěn)定細(xì)菌外膜—肽聚糖復(fù)合體的作用。
2. OmpA蛋白:大腸桿菌OmpA蛋自單體分子量與透道蛋白相似,約為35000d,但它們?cè)?/span>SDS中的溶解特性有明顯的差異。因而當(dāng)OmpA蛋白經(jīng)SDS加熱再經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分析時(shí)可見到其泳動(dòng)速度明顯地減小,OmpA蛋白的SDS“加熱修飾性"現(xiàn)象是這種蛋白的一個(gè)很重要特性。淋球菌的Ⅱ型蛋白與布氏桿菌的Ⅲ型蛋白同OmpA蛋白具有相同的特性,故而它們可能屬于同一類蛋白質(zhì)。
與透道蛋白不同的是,OmpA蛋白并不形成對(duì)SDS抵抗的寡聚體,雖然在外膜中OmpA蛋白間可發(fā)生交聯(lián),但在自然情況下這種蛋白質(zhì)并不能形成同源性寡聚體,α-衍射研究亦證實(shí)了這一點(diǎn)。OmpA蛋白可與脂蛋白聯(lián)結(jié)在一起。
OmpA蛋白富含β-折疊結(jié)構(gòu),這樣可以使外膜的厚度增加。同時(shí)OmpA蛋白可作為噬菌體的受體并可與肽聚糖層發(fā)生交聯(lián)。OmpA突變株對(duì)于氨基酸的總轉(zhuǎn)運(yùn)率下降,亦不能轉(zhuǎn)運(yùn)肽類。缺乏OmpA蛋白的突變株細(xì)菌的外膜結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,并缺失細(xì)胞接合的功能。大腸桿菌OmpA蛋白氨基酸順序已弄清,其176~187位氨基酸順序?yàn)?/span>Ala--Val-Ala-Pro-Ala-Pro-Ala-Pro-Ala-Pro-Ala-Pro,相似于免疫球蛋白接合部的區(qū)域順序。這一順序?qū)?/span>OmpA蛋白分成兩個(gè)部分,N-末端部分插入到外膜中,而C-末端暴露在膜的內(nèi)側(cè)。
3.透道蛋白:大腸桿菌K-12由OmpF 、OmpC及PhoE基因編碼的蛋白,稱為透道蛋白,因?yàn)樗鼈兛尚纬上鄬?duì)非特異性的通道或透道,而允許小分子親水性物質(zhì)通過外膜。透道蛋白缺乏的突變株已被證實(shí)可允許營養(yǎng)物質(zhì),抗菌素及抑制劑擴(kuò)散入細(xì)胞。
其他細(xì)菌所產(chǎn)生的透道蛋白有:鼠傷寒沙門氏菌LT2的Om-pD蛋白、大腸桿菌前噬菌體所編碼的Ⅱ型蛋白或LC蛋白、含莢膜大腸桿菌所產(chǎn)生和K蛋白等等。
4.參與特異性擴(kuò)散過程的蛋白:大腸桿菌的LamB蛋白參與麥芽糖及多聚麥芽糖透過外膜。其他有TSX蛋白或T6受體蛋白(參與核苷酸的轉(zhuǎn)運(yùn))、TonA(FluA)蛋白或T1、Ts受體蛋白(參與高鐵血紅素的攝取)、FepA蛋白(參與Fe3+-螯合物的攝取)及BtuB蛋白(參與維生素B12的攝取)等等。
5.其他蛋白:有一些酶定位于外膜上,這些酶類包括磷脂酶A1及蛋白酶。另外,從明尼蘇達(dá)沙門氏菌提取到了一種與內(nèi)毒素有強(qiáng)烈親和作用的蛋白,其性質(zhì)不詳。
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