Micro-CT檢測腫瘤小鼠模型實驗報告

*上海藥物研究所

廣州中科愷盛醫療科技有限公司

概述：7月7 -9日在*上海藥物研究所分別對小鼠顱內神經膠質瘤、乳腺癌肺轉移模型、以及胃癌的肝轉移模型的裸鼠進行micro-CT造影以觀察腫瘤模型制備和轉移情況。實驗結果表明中科愷盛的ZKKS-MCT-III型micro-CT系統可以清楚地在體、無創、連續動態地觀測到腫瘤在小鼠體內的分布，所占體積的大小和腫瘤的生長變化的情況；實驗結果達到了預期目的。

實驗日期：2010.07.07-07.09

實驗目的: 檢測各種腫瘤模型的制備情況以及腫瘤在小鼠體內的生長分布情況

實驗儀器和試劑：

    ZKKS-MCT-III micro-CT系統, ZKKS-MCT-III micro-CT系統軟件；

造影劑：臨床用碘海醇造影劑；實驗中必須的注射器等耗材。

實驗對象：

表1 用于實驗的小鼠情況

實驗人員：陳奕、周遠鋒、溫微微、劉俊廷、陳曉峰

實驗步驟：

1. 顱內神經膠質瘤腫瘤micro-CT掃描

（1）成像前的準備

小鼠注射麻醉劑進行麻醉；

小鼠支架固定小鼠，膠帶緊固頭部。

（2）micro-CT數據采集

開始掃描，沒有注射造影劑：

X光管電壓：60KVp；功率：50W；探測器觸發方式：內觸發； 拼合模式：Binning 1；投影數：500個視角；

Micro-CT掃描重建分割后的結果如圖1所示。

圖1 通過micro-CT重建后并對切片進行分割所得到的腫瘤組織的三維顯示結果

（圖中紫色的組織為腫瘤組織，金黃色為骨骼）

該小鼠沒有注射任何造影劑，對分割后的數據軟件計算得到該腫瘤的體積為2.174mm³。

實驗（一）總結：實驗中的神經膠質瘤裸鼠模型在構建時是以在頭皮下十字架為原點往前（向裸鼠嘴的方向）0.5mm，往右大約8mm, 再向顱內的方向約3.2mm的地方進行腫瘤細胞接種。腫瘤位于裸鼠的紋狀體內，micro-CT成像重建的結果與造模的位置*一致。本實驗證明micro-CT掃描顱內腫瘤的結果是準確可靠的，同時證明神經膠質瘤在裸鼠顱內紋狀體部位的造模是成功的。

2. 乳腺癌231-luc肺轉移micro-CT掃描實驗

（1）成像前的準備

對肺轉移裸鼠模型注射麻醉劑進行麻醉；

將該裸鼠固定到小鼠支架上。

（2）micro-CT數據采集

開始掃描，參數設置如下：

X光管電壓：60KVp；功率：50W；探測器觸發方式：內觸發； 拼合模式：Binning 1；投影數：500個視角；

圖2 通過micro-CT重建后并對切片觀測肺部沒有明顯的腫瘤組織

掃描后觀看重建結果如圖2所示，在肺部沒有發現明顯的腫瘤組織，隨后我們對小鼠進行了解剖，解剖出來的肺組織中沒有發現腫瘤轉移灶，證實micro-CT的掃描重建結果與事實相符。

實驗（二）總結：腫瘤轉移模型構建中可以通過micro-CT準確判斷腫瘤轉移灶的形成，對于分析在體、連續、無創地分析腫瘤的發生、發展以及凋亡都有十分重要的作用。實驗中可以避免殺死小鼠去觀測小鼠體內腫瘤的情況。

3. 胃癌肝轉移裸鼠模型micro-CT掃描實驗

實驗中我們采用了臨床的醫用碘海醇CT造影劑對小鼠臟器組織和腫瘤組織進行對比度的造影，對胃癌肝轉移模型進行了micro-CT造影成像。

實驗步驟：

（1）   成像前的準備

7月7日 預先對小鼠進行造影；

7月8日 對小鼠注射麻醉劑進行麻醉。

7月8日 14:25開始掃描該裸鼠

X光管電壓：60KVp；功率：50W；探測器觸發方式：內觸發； 拼合模式：Binning 1；投影數：500個視角；

Micro-CT掃描重建結果如圖3所示，（a）圖中為胃癌腫瘤轉移到腎中的腫瘤區域（紫色線條圈出的區域），（b）圖為肝中幾個轉移灶中的一個微轉移灶的腫瘤組織，（c）圖為（b）圖的局部放大圖。

（a）                         （b）                    （c）

圖3 利用臨床碘海醇造影劑造影腫瘤組織與臟器組織對比度增強效果

圖 4 裸鼠腫瘤和臟器分割后三維重建顯示的結果

從圖4可以明顯的看到腫瘤在小鼠體內的分布情況，胃癌腫瘤轉移到肝上的三個微小腫瘤的體積分別為0.7767mm³、1.1125 mm³、1.1261mm³、在腎中的腫瘤體積為20.2666 mm³。解剖出來后觀察到的結果與micro-CT掃描的結果是一致的。

實驗（三）總結：實驗中采用臨床用的碘海醇造影劑通過一定的方式也可以很好的提高臟器或腫瘤的對比度；這種造影方法可以大大節約小動物造影劑昂貴的試劑費用。

結論：利用ZKKS-MCT-III micro-CT系統可以在體、非侵入、連續動態觀測腫瘤細胞在小鼠體內的生長及體積變化情況。本次實驗數據表明不但利用該儀器可以監測造模情況，還可以在將來的腫瘤模型構建成功后，利用該micro-CT系統準確地對給藥治療過程中腫瘤體積和形狀等情況進行觀測。