分光光度計(jì)工作原理的限制性條件分光光度計(jì)的工作原理是是物質(zhì)對光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。
論瑯伯-比爾定律的限制性條件:
其一:通過溶液的光必須是平行的;
其二:通過溶液的光必須是單色光;
其三:待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過高,這是瑯伯-比爾定律首要的三個(gè)前提條件。
在實(shí)際的分光光度計(jì)的制造和使用過程中這三個(gè)條件是不可能達(dá)到的:
其一:因?yàn)楣馐侵本€傳播的,在分光光度計(jì)制造過程中,燈源發(fā)出的光是發(fā)散的,經(jīng)過聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過溶液的整體過程中,光是不可能平行的。
其二:燈源發(fā)出的光是復(fù)合光,經(jīng)過狹縫,再經(jīng)過光柵分光等步驟,因?yàn)槭艿姜M縫和光柵本身的限制,光柵分光不可能達(dá)到純單色光。還有光度計(jì)的整體設(shè)計(jì)問題,光度計(jì)不可能沒有其它的雜光存在。
其三:用戶的溶液也不可能是純凈的,也會含有一些雜質(zhì),這些對光度的吸收都會存在影響。除以上三個(gè)方面的影響外,在實(shí)際的光度計(jì)應(yīng)用過程中還會存在其他因素的影響,例如:
1、經(jīng)過比色皿的光是否垂直;
2、比色皿寬度是否為10mm的標(biāo)準(zhǔn)值;
3、測試波長是否準(zhǔn)確;
4、程序設(shè)計(jì)是否存在漏洞等等,都會直接影響到利用瑯伯-比爾定律計(jì)算出的結(jié)果。
所以在日常的測試過程中,得出的結(jié)果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的,只是我們關(guān)注偏差多少的問題。
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