zui近,有一些ELISA方法的初做實驗者打來,就自己實驗之前收集樣本方面有一些不清楚的地方,想咨詢下我們公司是否就這方面也有專業的技術指導。現在,恒遠的技術人員今天就與您分享下收集樣本及運送過程中一些指導注意事項。
樣本收集
1、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
① 不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
② 抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。生化實驗一般建議用肝素抗凝。
選擇抗凝的注意點:
① 每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
② 收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③ 抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④ 抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2、組織樣本的收集:
① 樣本采集:取組織塊(一般每種組織需0.2g以上)在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準確稱重,放入凍存管或離心管中。
② 樣本保存:動物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,當天進行測定,如放置時間過長相關酶活會有所下降,部分指標4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測定可存5~7天等)
樣本的運輸、轉存
① 血液及組織樣本收集齊后深低溫凍存,將凍存的標本,放置在裝有5-10公斤干冰的泡沫盒中密封保存運輸。(干冰保證-40℃的溫度,防止樣本的反復凍融,5-10公斤的干冰可以保證5-7天的溫度)
② 新鮮細胞可用充氮法。2-3天內送達;收集的細胞及裂解細胞冷凍液氮或干冰運輸。
③ 細菌等樣品冰袋低溫運輸。
④ 免疫組化石蠟包埋樣品可加好固定液低溫運輸,或者包埋成蠟塊后常溫運輸;免疫組化的冰凍樣本液氮或干冰運輸。
⑤ PCR相關實驗使用收集細胞,可直接在細胞中加TRIzol充分裂解后用冰袋低溫運輸。
⑥ 客戶所提供的試劑及試劑盒根據試劑本身保存要求運輸。
注意事項
① 本市可上門取樣;外地客戶請參照上述條件運輸,快遞送達;
② 干冰、冰袋等低溫材料要充足,保證在運達目的地之前沒有消耗完。
[正常參考值] 各實驗室可根據檢測方法的不同確立正常參考值。
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