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液相色譜儀的使用方法

來源:上海金鵬分析儀器有限公司   2015年07月10日 08:26  

液相色譜儀的品牌、種類很多,各家的使用方法也不盡一樣,主要看你是那一款的液相色譜儀,當初購買設備時,廠家的工程師會培訓使用方法。液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。液相色譜-質譜連用技術受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發展很快如在環境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發烴類,使環境污染分析得到新的發展。

液相色譜儀的使用方法:

內容:

1  開機

1.1  打開電腦。

1.2  打開液相色譜各個模塊的電源。

1.3  雙擊桌面“儀器—聯機”,進入聯機界面。

1.4  排氣:

1.4.1  手動旋開處沖洗閥(逆時針旋轉約1圈)。
1.4.2   右鍵單擊“泵”圖標區域,選擇“方法…”選項,進入泵編輯畫面,設流速:5ml/min(一般為3-5ml/min),點擊“確定”。

1.4.3  右鍵單擊“泵” 圖標,點擊“控制…”選項,選中“ON”,點擊“確定”,則系統開始沖洗,直到管線內(由溶劑瓶到泵入口)無氣泡為止,(一般為5分鐘),切換通道繼續沖洗,直到所有要用通道無氣泡為止。

1.4.4  右鍵單擊“泵” 圖標,點擊“方法…”選項,設流速:0ml/min,手動旋緊沖洗閥。

1.4.5  右鍵單擊“泵”圖標,點擊“方法…”選項,按照方法要求選擇合適比例的流動相,設流速:1.0ml/min。

1.4.6  同理右鍵單擊“柱溫箱”,“檢測器”圖標,點擊“方法…”選項,按照方法的要求設置溫度,波長,點擊“控制” 選項,“ON”打開柱溫箱和檢測器。

2  編輯方法

2.1  點擊“方法”-“編輯完整方法”開始編輯完整方法。

2.2  選中除“數據分析 ”外的三項,進入下一選項卡。

2.3  方法信息:在“方法注釋”中加入方法的信息(如:This is for test?。_M入下一選項卡。

2.4  參數設定:在“流速”處輸入流量, 如1.0ml/min,停止時間:如10 min(該停止時間僅為做一個樣品需要的時間),按照要求選擇合適比例的流動相配比,如乙腈:水=75:25,A為水,B為乙腈,則設置B:75%即可。進入下一選項卡。

2.5  自動進樣器參數設定: 選擇“洗針進樣”----可以輸入進樣體積和洗瓶位置,進入下一選項卡。

2.6  柱溫箱參數設定: 在“溫度”下面的空白方框內輸入所需溫度,如:40度。進入下一選項卡。

2.7  UV檢測器參數設定: 在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm。點擊確定。

2.8   在“ 運行時選項表 ”中,選中“ 數據采集”,點擊“確定”。
2.9  從“方法”菜單,選中“方法另存為…”,輸入一方法名,如“測試”,點擊“確定。

3  單次采集

3.1  從“運行控制”菜單中,選擇“樣品信息”選項,選擇合適的路徑,在“數據文件”中選擇 “前綴/計數器”,輸入樣品瓶的位置,點擊“確定”。

3.2 基線平穩后約10分鐘,從“運行控制”菜單中選擇“運行方法”。

4  多次數據采集

4.1  按照步驟2 編輯完整方法。

4.2  點擊“序列”-“序列表”,輸入“樣品瓶”“樣品名稱”,“進樣次數”,選擇合適的“做樣方法”

4.3  點擊“序列”-“序列參數”,選擇序列數據的保存路徑(序列會自動生成以“序列名稱-時間”為名稱的文件夾保存數據),數據建議以選擇 “前綴/計數器”保存。

4.4  從“序列”菜單,選中“序列另存為…”,輸入一序列名,如“測試”,點擊“確定。

4.5  從“運行控制”菜單中選擇“運行序列”。

5  數據分析(脫機狀態使用)

5.1  雙擊“儀器 —脫機”圖標 進入的脫機畫面。

5.2  從“視圖”菜單中,點擊“數據分析”進入數據分析畫面。

5.3  從“文件”菜單選擇“調用信號”,選中您的數據文件名。點擊“ 確定”,則數據被調出。(如預建立標準曲線,應先打開濃度較低的標樣圖譜。)

5.4  做譜圖優化:從“圖形”菜單中選擇“信號選項”。從“范圍” 中選擇“滿量程” 或“自動量程” 及合適的時間范圍或選擇“自定義量程” 調整。反復進行,直到圖的比例合適為止。點擊“ 確定”。

6  積分:

6.1  從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項,選擇合適的“斜率靈敏度”,“峰寬”,“zui小峰面積”,“zui小峰高”。點擊 ,自動加載積分參數。

6.2  點擊左邊“√”圖標,將積分參數存入方法并退出“積分事件”。

6.3  如積分結果不理想,則修改相應的積分參數,直到滿意為止。

7  標準曲線

7.1  點擊“校正”-“校正設置”,輸入“含量單位”。

7.2  點擊“校正”-“新建校正表”,點擊確定。輸入“化合物名稱”和“含量”,點擊“確定”,按照提示刪除其他組分。

7.3  至此完成單級校正,如要增加校正級別,應從“文件”菜單選擇“調用信號”,選中您的數據文件名(第二個標樣),點擊“校正”-“添加級別”,點擊確定,輸入“含量”,依次增加校正級別。

8  打印報告

8.1   從“報告”菜單中選擇“設定報告”選項,點擊“定量結果”框中“定量”右側的黑三角,選中“外標法”,其它選項不變,點擊“ 確定”。

8.2  從“報告”菜單中選擇“打印報告”,則報告結果將打印到屏幕上,如想輸出到打印機上,則點擊“報告” 底部的“打印”鈕。

8.3  點擊“文件”-“另存為”-“方法”,把數據分析方法保存,下次分析可直接在“文件”-“調用”-“方法”下,將該方法調出使用。(調用的方法中含有積分方法,標準曲線方法和打印報告方法)

9  關機

9.1  關機前,先關紫外燈,用相應的溶劑(甲醇或乙腈)充分沖洗系統大約30分鐘。(色譜柱zui終應保存在甲醇或乙腈中)

9.2  退出化學工作站,依提示關,及其它窗口,關閉計算機。

9.3 關閉Agilent 1260各模塊電源開關。

10  其它注意事項

10.1 當樣品運行時,切勿打開自動進樣器前遮蓋,否則進樣過程停止。

10.2 系統發生漏液時,機器會檢測到并停止進樣,狀態指示燈為紅色。檢查擦干并安置好漏液處,擦干漏液傳感器,單擊ON按鈕,系統重新初始化。

10.3 注意紫外燈使用壽命,切勿來回開關紫外燈。

液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。與試樣預處理技術相配合,HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展,有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。

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