小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中 IgG1 抗體亞型（ IgG1）表達。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒實驗原理：

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）表達。用純化的抗原

包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中 IgG1 抗體亞型（ IgG1）相結合，經洗滌除去未

結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經

過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值） ，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）的存在與否。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒組成：

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  陽性對照  0.5ml×1 瓶

3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  陰性對照  0.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份

5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張

6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒操作步驟：

1.  編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.  加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結 ：

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒計算和結果判定 ：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）陰性

陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）陽性。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒注意事項：

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須

注意安全。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6 個月