葡聚糖凝膠 LH-20的使用方法
將干粉浸泡于60-70%乙醇中(充分攪拌),洗去可能存在的殘留物,抽干然后濕態不間隙裝柱,不能出現凝膠斷層(否則要重新裝柱),動態用一倍柱體積的60-70%乙醇淋洗,再用水洗凈乙醇即根據自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩為止,如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質,并根據性質確定柱高。如使用相同的溶劑,在以后的層析中柱平衡可以省略。
(1) 選擇條件:
梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統;極性小者一般用不含水的系統,常用正己烷二-氯-甲烷甲醇系統。
(2)飽和層析柱:
用洗脫劑將凝膠搖勻,直立柱身,讓其自然沉降,此時要防止氣泡留在其中。至少半小時打開開關,流出幾個柱體種的洗脫劑,目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。
(3)樣品處理:
用盡量少的洗脫劑溶解樣品,常壓過濾。
(4)濕法上柱:
這也是要有技巧的步驟。
(5)洗脫:
控制流速,一般1drop/s以下,可參見廠家的一些參數;必要時更改極性(很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢)。
(6)再生以備下次使用。
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