雞(Chicken) 白細(xì)胞介素6（IL-6） ELISA 檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗原理：

IL-6試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-6濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-6和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-6的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

1．  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3．  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7．  底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9．  按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5、  保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備

1．  標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3．  加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

局限

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié)果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的IL-6標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-6含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/ml

相關(guān)產(chǎn)品如下：

大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒
大鼠C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒
大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒
大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
大鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒 
大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒
大鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒
大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒
大鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA試劑盒 
大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 
大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒 
大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒
大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA試劑盒 
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒 
大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 
大鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒
大鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒
大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒
大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒
大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒
大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒
大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒
大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒
大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒
大鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 
大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒
大鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 
大鼠白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒 
大鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒
大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 
大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒
大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒
大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒
大鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 
大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒
大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒
大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒
大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒 
大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒
大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒
大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒
大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒
大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒
大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒
大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒
大鼠活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒
大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒
大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒
大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒
大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒 
裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒
裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒 
裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒
裸鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒
倉鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B) ELISA試劑盒
倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒
倉鼠甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒
倉鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒
豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA試劑盒 
豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 
豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒
豚鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒
豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒 
豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒
豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒 
豚鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒
豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒
豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 
豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒
豚鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒
豚鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 
豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒
豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 
豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
豚鼠生長激素(GH)ELISA試劑盒 
豚鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒
豚鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
豚鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒 
豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒
豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒
豚鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒
豚鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒
豚鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒 
豚鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒
豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒
豚鼠表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 
豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 
豚鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 
豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒 
豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒 
豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 
豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒