常用抗體的應(yīng)用范圍及選用

在臨床活檢工作中，對(duì)于各種腫瘤的正確判斷，歷來是外科病理學(xué)的核心問題。因它關(guān)系到患者的治療和預(yù)后的問題。在免疫組化技術(shù)沒開展以前，主要靠HE，特殊染色和組織化學(xué)來進(jìn)行鑒別和診斷各種腫瘤，這些在當(dāng)時(shí)雖然解決了不少的問題，但是對(duì)于較為復(fù)雜，較為多型性的腫瘤，就不能對(duì)其起源及所含的成分作出正確的判斷。隨著免疫組化工作的開展，給許多以往有待于解釋原因的病理診斷上帶來了福音。許多以往無法解釋原因的病例，經(jīng)現(xiàn)今免疫組化染色技術(shù)的處理后，能夠?qū)ζ淦鹪矗嚓P(guān)的抗原或抗體成份給予顯示出來，為腫瘤的診斷提斷了形態(tài)學(xué)的依據(jù)。雖然如此，對(duì)于一些較為復(fù)雜的抗原，就要根據(jù)具體情況作具體分析。在生物界里面某些細(xì)胞僅具有一個(gè)抗原的決定簇，這是極少見的，而常見的是具有數(shù)百個(gè)乃至數(shù)千個(gè)的抗原決定簇。數(shù)量之多但又不是千篇一律，并非都在細(xì)胞的表面表達(dá)出來，加上細(xì)胞的排列有高有矮，有長(zhǎng)有短，切片時(shí)有的被切到細(xì)胞膜，有的被攔腰斬?cái)啵虼嗽谝粡埱衅峡吹降耐环N抗原的表達(dá)也不一致，有的在細(xì)胞核，有的在細(xì)胞膜，也有的在細(xì)胞漿，這種現(xiàn)象是由于切片的原因所致。但是，抗原的表達(dá)，在原來的表達(dá)上就有核、漿、膜之分。有的抗原可在一個(gè)部位表達(dá)，有的抗原 則可在兩個(gè) 部位表達(dá) ，例如PCNA，它可以在細(xì)胞核表達(dá)，也可在細(xì)胞漿表達(dá) 。有的抗原，可表現(xiàn)為雙向表達(dá)，如上皮（樣）腫瘤間皮腫瘤和滑膜內(nèi)瘤等，用角蛋白標(biāo)記時(shí)，可有陽性表達(dá)，用波形蛋白標(biāo)記時(shí)，也可有陽性表達(dá)。對(duì)于上述的許多現(xiàn)象，在觀察檢測(cè)時(shí)，就要特別地小心，不斷地積累經(jīng)驗(yàn)，以便于更好地鑒別各種抗原的所在部位。某些抗原不是在任何時(shí)候能表達(dá)出來的它們 需要一定的時(shí)間和條件。有人根據(jù)腫瘤細(xì)胞增生的能力將其分為三個(gè)階段：
1.進(jìn)入細(xì)胞周期的增殖細(xì)胞，這包括G1、G2及M期的細(xì)胞。
2.暫時(shí)未進(jìn)入細(xì)胞周期，但在某特定的時(shí)期和條件下，使其開始增殖的細(xì)胞（GO期）。
3.靜止的再進(jìn)入增殖周期的細(xì)胞，這些細(xì)胞己分化成熟，根據(jù)新陳代謝的規(guī)律，它們逐漸地進(jìn)行消之階段。
上述三個(gè)階段中，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系z(mì)ui為密切的是增殖細(xì)胞。因此，臨床檢測(cè)各種腫瘤抗原的表達(dá)，應(yīng)根據(jù)上述 三個(gè)階段來加以區(qū)別，仔細(xì)加以分析，在作出診斷前，應(yīng)根據(jù)免疫組化的表達(dá)，細(xì)胞的分化成度來加以區(qū)別，不要以為用了某種抗體抗原不表達(dá)就確定是不屬該抗體來源的腫瘤。有人在檢測(cè)淋巴瘤活性的研究中，發(fā)現(xiàn)PCNA在細(xì)胞周期的S期數(shù)量增高，G2期下降，核分裂期zui低，在 G1期又開始增高。我們?cè)跈z測(cè)各種腫瘤的抗原時(shí)發(fā)現(xiàn)，在同一病例中，增生的腫瘤細(xì)胞抗原表達(dá)強(qiáng)，成熟的細(xì)胞表達(dá)與增生的細(xì)胞差不多，幼雅的細(xì)胞表達(dá)較弱，未分化的細(xì)胞呈陰性。基于上述的情況，我們應(yīng)充分認(rèn)識(shí)到，診斷各種腫瘤，免疫組化起到了重要的作用中，它可以為診斷提供可靠的準(zhǔn)確的形態(tài)學(xué)依據(jù)，它為腫瘤的來源的定性，提供了理論及實(shí)物。但是，我們也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，任何事情都 不能有的準(zhǔn)確，免疫組化的檢測(cè)也一樣，有時(shí)也會(huì)受到未分化細(xì)胞的制約，因此，在作出診斷前，應(yīng)多做多方面的檢查，結(jié)合各方面的情況，作出正確的判斷。為了更好地應(yīng)用各種抗體來檢測(cè)相應(yīng)的抗原，下面我們將介紹常用抗體檢測(cè)范圍。

（一）、常用上皮組織及腫瘤標(biāo)記物
1.角蛋白（Keratin）
角蛋白分為表皮角蛋白和細(xì)胞角蛋白兩種，這是根據(jù)其分部的部位而分的。表皮角蛋白包括皮膚表皮，消化道粘膜上皮、腺上皮甲狀腺濾泡上皮、氣管、支氣管上皮、肺泡上皮，角膜上皮、前列腺上皮等。細(xì)胞角蛋白包括頜下腺，胰腺，胸腺，細(xì)胞，肝細(xì)胞，腎小管細(xì)胞等。目前，應(yīng)用上述細(xì)胞中間絲角蛋白作為抗原所制備的抗體有單克隆抗體和多克隆抗體。角蛋白可有19個(gè)亞型 ，分為堿性和酸性，從1-8為堿性，9-19為酸性，分子量40-68不等，復(fù)層鱗上皮多為高分子量，單層上皮則多為低分子量，了解這些在臨床的鑒別診斷及抗體的應(yīng)用中都 有極大的幫助。目前，檢測(cè)這類特質(zhì)的抗體很多，根據(jù)不同的克隆生產(chǎn)出不周類型的抗體。常用的抗體有：
①單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白（Monoclonal mouse anti human cytokeratin）克隆為MNF116。
該抗體應(yīng)用范圍，各類的冰凍切片，涂片，細(xì)胞培養(yǎng)片和經(jīng)甲醛固定石蠟包埋的組織切片 。用本抗體檢測(cè)的陽性組織有：鱗狀上皮，甲狀腺濾泡上皮消化道上皮，胰腺膽管上皮，肝膽管上皮，角膜上皮等以及發(fā)生于上述來源的腫瘤。應(yīng)該注意的是有一些腫瘤在檢測(cè)時(shí)，可出現(xiàn)兩種陽性物，即用兩種抗體來檢測(cè)如采用CK和Vimentin，可出現(xiàn)雙向表達(dá)陽性的腫瘤有：癌內(nèi)瘤，子宮內(nèi)膜腺癌肺腺癌，上皮樣內(nèi)瘤，滑膜內(nèi)瘤，唾液腺肌上皮瘤，間皮瘤等等。這是由于在這些腫瘤中存在著兩種不同的中間絲的緣故。
應(yīng)用該抗體檢測(cè)呈陰性的腫瘤有：各種淋巴瘤，各類肌源性的腫瘤，惡性黑色素瘤，骨腫瘤，纖維組織腫瘤，脂肪腫瘤，神經(jīng)組織腫瘤和精原細(xì)胞瘤等。
在檢測(cè)某些腫瘤時(shí)，常可出現(xiàn)這樣的問題，在同一張切片上，同樣的鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞，有的抗原表達(dá)為強(qiáng)陽性，有的表達(dá)為中度陽性性，有的表達(dá)為弱陽性，甚至有的呈陰性。這主要是由于各種細(xì)胞處于增生的不同階段，細(xì)胞分泌的抗原量不同，因而表達(dá) 也不同。
該抗體可用各種方法檢測(cè)，但用真空負(fù)壓LSAB法。產(chǎn)品說明書注明該抗體稀釋度1：50至1：100，我們使用為1：100。
②單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白，克隆為L(zhǎng)P34。該抗體的使用范圍，檢測(cè)各種組織基本上與①號(hào)抗體相同，但效果不如①號(hào)。
③單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白，克隆為35BH11。該抗體的特點(diǎn)是：A，可檢測(cè)幾乎所有的非鱗狀上皮包括卵巢腺癌，胃腸道腺癌，甲狀腺癌，肝癌， 子宮癌，腎癌等。B、不與鱗狀上皮起反應(yīng)。C、對(duì)膀胱癌，鼻咽癌，胸腺癌等部分陽性。但是，該 抗體只能用于冰凍切片 ，涂片和細(xì)胞培養(yǎng)片。不能用于石蠟切片 。
④單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白，克隆34BE12。該 抗體屬于高分子量類型，它可檢測(cè)鱗狀上皮管上皮和 復(fù)層上皮的組織及其來源的腫瘤。
適用范圍：可用于各種類型的切片 。
2.單克隆小鼠抗人上皮細(xì)胞膜抗原 （Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA）
上皮細(xì)胞膜抗原是上皮細(xì)胞表面大分子糖蛋白物質(zhì)，它不僅存在于各種上皮，以及各種上皮來源的腫瘤，也可存在于部分非上皮及其來源的腫瘤，如漿細(xì)胞，組織細(xì)胞等。
應(yīng)用EMA來檢測(cè)正常的組織時(shí)，其陽性表達(dá)主要在細(xì)胞膜上，但在檢測(cè)腫瘤時(shí)，這種陽性物不僅在細(xì)胞膜上出現(xiàn)，也可在細(xì)胞漿中見到。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞在分化增生時(shí)，陽性物表達(dá)強(qiáng)陽性。當(dāng)腫瘤細(xì)胞趨于成熟或已成熟時(shí)，陽性物表達(dá)較弱，腫瘤細(xì)胞未分化時(shí)，抗原表達(dá)呈陰性。
EMA在檢測(cè)上皮組織及其來源的腫瘤組織時(shí)，抗原表達(dá)陽性，在檢測(cè)非上皮來源的腫瘤如漿細(xì)胞瘤，滑膜內(nèi)瘤，上皮樣內(nèi)瘤，平滑肌內(nèi)瘤，神經(jīng)鞘瘤，及來惡性神經(jīng)鞘瘤時(shí)，抗原也可表達(dá)為部分陽性。因此認(rèn)為：EMA不是上皮性來源腫瘤所*的標(biāo)記物，它的特異性不高。
該 抗體適用范圍廣，適合于各種類型的切片，應(yīng)用真空負(fù)壓LSAB法檢測(cè)時(shí)，稀釋度在1：100。
3.癌胚抗原（Carcinombryonic antigen ,CEA）
自1965年Go等從結(jié)腸癌分離出一種腫瘤的相關(guān)抗原后，經(jīng)過進(jìn)一步的研究后發(fā)現(xiàn)，它存在于胎兒的腸里，由于人們將其稱為癌胚抗原。在實(shí)際應(yīng)用中，CEA是一種廣譜的標(biāo)記物。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，它對(duì)胃癌，腸癌，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，子宮頸癌，子宮體腺癌，卵巢癌，皮膚鱗狀細(xì)胞癌，膀胱移行上皮癌，食道癌等，抗原表達(dá)陽性，在上述的同類組織及癌旁類性組織，也可見到陽性物，有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，用CEA標(biāo)記滑膜內(nèi)瘤，間皮瘤，上皮樣內(nèi)瘤和腦膜瘤，也可表達(dá)陽性。
目前，CEA有兩種產(chǎn)品，一是單克隆抗體，另一是多克隆抗體。
①單克隆小鼠抗 人CEA，克隆為A5B7。
該抗體的特點(diǎn)，純度高，雜質(zhì)含量少，很少引起非特異性染色，同時(shí)，也不與含糖蛋白的物質(zhì)起反應(yīng)，因此，背景清晰干凈。
該抗體可檢測(cè)上述的病種及其來源的組織，適用于各種切片的染色。稀釋度為1：100。
②兔抗人CEA。該抗體為多克隆抗體，純度不如①號(hào)抗體，檢測(cè)及適應(yīng)與①號(hào)抗體相同，但效果不如①號(hào)抗體，且較容易產(chǎn)生背景。稀釋度在1：300。
4.山羊抗人甲胎蛋白（Goat anti human alphafeloprotein,AFP）
AFP主要由胎兒肝細(xì)胞和卵黃細(xì)胞產(chǎn)生的一種酸性糖蛋白少量由胎兒的胸腺、肺、胃、腸道的細(xì)胞產(chǎn)生。AFP也不是一種肝癌*的標(biāo)記物。初用時(shí)把AFP作為原發(fā)性肝癌的一項(xiàng)特異性診斷指標(biāo)。隨著免疫組化的深入開展和研究的深入進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：AFP的升高不僅在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病例，在生殖細(xì)胞腫瘤卵黃瘤和睪丸胚胎癌的病例也可大量見到。
用AFP檢測(cè)后顯示陽性的病例有：原發(fā)性肝細(xì)胞癌，胃癌，卵黃 瘤和睪丸胚胎癌等。其陽性 表達(dá)部位主要在細(xì)胞漿，也有少量在細(xì)胞膜和細(xì)胞核上。
該抗體適合于各種切片的標(biāo)記，可用任何一種 免疫 方法來進(jìn)行染色，稀釋度為1：100-1：300。
上述四種類型的抗體可作為來源于上皮的腫瘤及其它來源的腫瘤的區(qū)別。只要損傷正確，抗體的質(zhì)量沒問題，就可獲得滿意的結(jié)果。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的組織，不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)，來選擇合適的抗體。當(dāng)然有的腫瘤決不是用一兩種抗體就能夠把它們給予區(qū)分開來。因此，要根據(jù)不同的情況合理使用抗體，以便作出正確的診斷。

（二）常用的間葉源性組織及其腫瘤的檢測(cè)抗體
間葉源性組織范圍廣，內(nèi)容多，它包括肌肉，纖維結(jié)締組織，脂肪，血管，周圍神經(jīng)，骨，軟骨，淋巴等組織。由于這方面涉及的東西較多且較復(fù)雜，因而在上述方面所發(fā)生的腫瘤，是腫瘤病理學(xué)中zui棘手和zui疑難的問題之一。隨著免疫組化技術(shù)在腫瘤鑒別診斷中的應(yīng)用，已經(jīng)克服了許多以往無法克服或者難以克服的問題。當(dāng)前，應(yīng)用于這方面檢測(cè)的抗體越來越多，下面將介紹幾種常用的抗體：
1.波形蛋白（Vimentin ,Vim）
Vim是原始的中間絲，它存在于所有的間葉組織細(xì)胞中，可以向神經(jīng)膠質(zhì)，肌源性細(xì)胞和上皮細(xì)胞中間絲演變。Vim是一種單克隆抗體，臨床應(yīng)用來作鑒別診斷的有：鑒別癌與內(nèi)癌，前者陰性，后者陽性；鑒別小細(xì)胞性腫瘤，這時(shí)應(yīng)多用幾種抗體，如CK，LCA和Vim，如為淋巴瘤，尤文氏瘤或神經(jīng)母細(xì)胞瘤，Vim為陽性；鑒別黑色素瘤和低分化癌時(shí)，Vim陽性。
應(yīng)用Vim檢測(cè)腫瘤陽性的有：HDR-S細(xì)胞，B免疫母細(xì)胞形淋巴瘤，漿細(xì)胞瘤，T 免疫母細(xì)胞及多形性T 淋巴瘤，平滑肌瘤和肉瘤，纖維瘤和肉瘤，脂肪瘤和肉瘤，橫紋肌肉瘤，血管瘤，粘液瘤，神經(jīng)纖維瘤，鞘瘤，惡性神經(jīng)鞘瘤，惡性纖維組織細(xì)胞瘤，纖維組織細(xì)胞瘤，惡性巨細(xì)胞瘤，間葉肉瘤，骨瘤和骨肉瘤，骨巨細(xì)胞瘤，軟骨細(xì)胞瘤，骨軟骨瘤，軟骨母細(xì)胞瘤，軟骨肉瘤，滑膜肉瘤，精原細(xì)胞瘤，黑色素瘤和惡性黑色素瘤，脊索瘤癌肉瘤，尤文 氏瘤，腦膜瘤，卵泡膜細(xì)胞瘤，顆顆細(xì)胞瘤，間皮瘤，等等。
在正常組織中，Vim標(biāo)記陽性組織的有：
平滑肌和橫紋膠肌細(xì)胞，肺泡吞噬細(xì)胞，血管及內(nèi)皮細(xì)胞，肝臟枯否氏細(xì)胞，滑膜細(xì)胞，漿細(xì)胞，奇形細(xì)胞，室管膜細(xì)胞，卵巢顆粒細(xì)胞，黑色素細(xì)胞等。
Vim是目前用來鑒別上皮性腫瘤還是間葉源性鐵常用抗體之一，不過，在應(yīng)用于鑒別腫瘤時(shí)，應(yīng)多選用幾種抗體。
Vim的抗體現(xiàn)市售的有幾種：
⑴單克隆小鼠抗Vim克隆3B4，該抗體稀釋度較高，可在1：200，它適用于各種切片，但在使用前必須抗原修復(fù)。
⑵克隆小鼠抗豬Vim，克隆V9，該抗體較早前使用，從已檢測(cè)的大量病例情況分析，該抗體效果不錯(cuò)。但該抗體zui大的缺點(diǎn)是稀釋度較不理想，僅在1：10左右，由于稀釋度不大，標(biāo)記的例數(shù)較少，成本較高，現(xiàn)已較少使用。
⒉Von Willebrand因子。
這種抗體在舊叫法中被稱為第Ⅷ因子相關(guān)抗原，如今被 稱為Von Willebrand因子，它可在各種內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞的胞漿中找到，因此在臨床的應(yīng)用中，它常被用來檢測(cè)由內(nèi)皮細(xì)胞來源的各種腫瘤，同時(shí)也用來檢測(cè)骨髓標(biāo)本中巨核細(xì)胞的增殖。該抗體使用前須做抗原修復(fù)。注意抗體有單抗 及多抗之分。
⒊CD34
該抗體被認(rèn)為是一種穩(wěn)定的，可靠的血管內(nèi)皮細(xì)胞及其來源的腫瘤的標(biāo)記物。它對(duì)毛細(xì)血管，小血管內(nèi)皮細(xì)胞顯示強(qiáng)陽性，對(duì)中至大血管內(nèi)皮細(xì)胞量選擇性陽性，對(duì)軟組織腫瘤，腫瘤 毛細(xì)血管，血管管和血管肉瘤的內(nèi)皮細(xì)胞呈陽性，對(duì)淋巴管內(nèi)皮陰性。使用時(shí)須做 抗原修復(fù)。
⒋CD31
該抗體與CD34的標(biāo)記范圍基本一樣。

（三）肌組織及其相關(guān)腫瘤的常用抗體
1.肌間線蛋白（Desmin,DM）
在橫紋肌的微細(xì)結(jié)構(gòu)中，有明暗帶之分，在明暗帶的中央有一薄膜稱為工膜。在心肌纖維結(jié)構(gòu)中，也有相似的工膜。這些結(jié)構(gòu)的主要成份就是由肌間線蛋白構(gòu)成的。此外，在心肌的閏盤，平滑肌中，也含有肌間線蛋白。
Desmin為一種中間絲蛋白，正常時(shí)可分布于平滑肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞骨骼骨細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞。臨床應(yīng)用時(shí)常用來檢測(cè)上述細(xì)胞來源的腫瘤如子宮肌瘤及肉瘤，胃，腸道 肌源性腫瘤各形，橫紋肌肉瘤和肌上皮瘤等。
該抗體適應(yīng)于各種組織切片，經(jīng)抗原修復(fù)后結(jié)果更佳。
2.肌球蛋白（Myosin）
骨髓肌的微細(xì)結(jié)構(gòu)在電鏡下可見到肌原纖維是由1-2千條平行的肌絲集成的來組成，肌絲分為粗肌絲和細(xì)肌絲兩種。粗肌絲由許多豆芽狀的肌球蛋白組成。在心肌和平滑肌發(fā)育分化中期，也可見到肌球蛋白。
目前，臨床應(yīng)用的有兩種抗體。
①M(fèi)yosin（skeletal）
這種抗體用于檢測(cè)骨髓肌及其來源的腫瘤它適合于各種切片，抗原修復(fù)后結(jié)果更好。
②Myosin（smooth Muscle）
這種抗體用于檢測(cè)肌上皮及平滑肌細(xì)胞以及這方面來源的腫瘤，它適合于各種組織切片，抗原修復(fù)后可獲得更好的結(jié)果。
3.肌動(dòng)蛋白（Actin）
肌原纖維由兩種成分組成，細(xì)肌絲和粗肌絲。細(xì)肌絲則由肌動(dòng)蛋白，原肌球蛋白和肌原蛋白三種成分組成，其中的肌動(dòng)蛋白，其分子呈球狀，它們互相連接形成長(zhǎng)鏈，每一條細(xì)肌絲都由兩條肌動(dòng)蛋白分子所構(gòu)成。
現(xiàn)臨床用于檢測(cè)肌動(dòng)蛋白的抗體有如下幾種：
①單克隆小鼠抗人肌動(dòng)蛋白，克隆為HHF35。它是一種廣譜標(biāo)記抗體，既可以用于檢測(cè)骨髓肌和骨髓肌來源的腫瘤，也可以用于檢測(cè)平滑肌，血管平滑肌，心肌，肌上皮細(xì)胞及其來源的腫瘤，它適合各種組織切片，不用微波抗原修復(fù)，也能獲得很好的結(jié)果。稀釋度為1：100。
②單克隆小鼠抗人肌動(dòng)蛋白（平滑肌）克隆為1A4。該抗體主要用于檢測(cè)平滑肌，心肌，血管平滑肌，肌上皮細(xì)胞及其來源的各種腫瘤，實(shí)驗(yàn)證明，毛細(xì)血管也可被清楚地顯示出來。它適合各種切片，稀釋度為1：100。

（四）淋巴組織及相關(guān)腫瘤檢測(cè)的常用抗體
淋巴組織的腫瘤成分較為復(fù)雜，有些與其它上皮來源的腫瘤在形態(tài)上較相似，鑒別較困難。因而免疫組化對(duì)淋巴組織腫瘤的定性較準(zhǔn)確。淋巴瘤是原發(fā)于淋巴結(jié)和淋巴結(jié)以外各種淋巴組織的惡性腫瘤。根據(jù)瘤細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)不同，把它們分成兩大類即何杰金病（Hodgkins disease,HD）和非何杰金淋巴瘤，（Non-hodgkins lymphoma,NHL）。
應(yīng)用抗體來檢測(cè)淋巴瘤的抗體目前有很多，光CD系列就有百余種，雖然各類繁多，但臨床常用的抗體，主要有以下幾種：
1.LCA（Leucoyte common antigen）
該抗體主要用于檢測(cè)正常白細(xì)胞即淋巴細(xì)胞（T.B），粒細(xì)胞，組織細(xì)胞和單核細(xì)胞及其來源的腫瘤。適合各種切片，不需特別處理。稀釋度1：200。
2.T細(xì)胞
T淋巴細(xì)胞在胸腺中進(jìn)行分裂分化，形成了具有各種特異性抗原受體的T細(xì)胞，因此它又被 稱為胸腺依賴細(xì)胞。T細(xì)胞數(shù)量zui多，功能又是多方面的根據(jù)它們的功能可將其分為 輔助T細(xì)胞，抑制T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞。
T淋巴細(xì)胞在淋巴結(jié)的分布通常在副皮質(zhì)區(qū)，因此免疫組化顯色后，在副皮質(zhì)區(qū)可找到陽性細(xì)胞，臨床常用的有兩種抗體。
①T細(xì)胞，CD45RO克隆為人WHL-1
該抗體幾乎可標(biāo)記所有的胸腺細(xì)胞還可檢測(cè)CD4和CD8以及成熟活化T細(xì)胞的靜止T細(xì)胞亞群及其來源的淋巴瘤細(xì)胞，該抗體適合于各種切片，不需各種處理方法，仍可獲得很好的結(jié)果，稀釋度為1：100。
②T 細(xì)胞，CD3，克隆為PS1
該抗體用來檢測(cè)正常和新生的T細(xì)胞，對(duì)早期的T細(xì)胞有較高的特異性。雖然它的特異性較高，但敏感性不如①號(hào)抗體。臨床應(yīng)用時(shí)，可兩種抗體同時(shí)應(yīng)用，以利于提高診斷的準(zhǔn)確率。它不需各種方法處理。稀釋度為1：100。
3.B細(xì)胞，CD20 克隆為L(zhǎng)26
B淋巴細(xì)胞跟T淋巴細(xì)胞不一樣，它的分化分裂是在胚胎肝及骨髓內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，在淋巴結(jié)中的B淋巴細(xì)胞，主要分布在濾泡反應(yīng)中心。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，反應(yīng)中心是B細(xì)胞各個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)化的場(chǎng)所，基本上需經(jīng)四個(gè)時(shí)期：
*期成熟的小淋巴細(xì)胞接受抗原信息后體積逐漸增大，細(xì)胞核表面出現(xiàn)凹陷或溝紋似裂隙被稱為小核裂細(xì)胞。第二期細(xì)胞繼續(xù)增大，核周圍有少量胞漿，如此被 稱為大核裂細(xì)胞。第三期核逐漸變化發(fā)展，成為圓形或橢圓形，裂 紋也隨著變化而消失，核內(nèi)出現(xiàn)核仁，胞漿增多，RNA和蛋白質(zhì)合成相繼增多，此時(shí)被稱為小無核裂細(xì)胞。第四期，細(xì)胞繼續(xù)增大，比原來的小淋巴細(xì)胞大好幾倍，核呈圓形或橢圓形，可見核分裂，胞漿豐富，被 稱為大無核 裂細(xì)胞。由于B細(xì)胞在不同時(shí)期的變化，因此在標(biāo)記時(shí)，應(yīng)使用不同類型的抗體，對(duì)其不同時(shí)期進(jìn)行標(biāo)記和判斷。
在臨床應(yīng)用中，檢測(cè)淋淋巴瘤不象研究淋巴瘤，那樣細(xì)致，只要將其分形就可以了。
該抗體不需特殊處理，稀釋度為1：100。
4.骨髓組織細(xì)胞抗原，克隆：Mac387
應(yīng)用抗體的呈色可將淋巴瘤分為三大類形即T、B淋巴細(xì)胞形和組織細(xì)胞形。該抗體可檢測(cè)正常的粒細(xì)胞，血液中單核細(xì)胞和組織中的組織細(xì)胞及其來源的腫瘤。
該抗體不需特殊的處理方法，稀釋度為1：100。
5.CD29
該抗體主要用于標(biāo)記B 細(xì)胞主要用于，B細(xì)胞淋巴瘤，B細(xì)胞白血病等的鑒別診斷，標(biāo)記時(shí)應(yīng)做抗原修復(fù)。
6.CD56

（五）神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌及其有關(guān)腫瘤抗體
1.神經(jīng)無特異性烯醇化酶（Neuron-specific enolase,NSE）
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)腦組織中有三種同2酶即dd.dr和rr。NSE屬于rr形。它不僅存在于神經(jīng)細(xì)胞及其軸突中，而且存在于各種內(nèi)分泌細(xì)胞及其有關(guān)腫瘤細(xì)胞內(nèi)。有人做過實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用NSE檢測(cè)69例APUD系統(tǒng)腫瘤，均表達(dá)為陽性，在16例外分泌腺如胰腺癌的檢測(cè)中 僅有2例陽性。可見NSE對(duì)于檢測(cè)APUD系統(tǒng)方面的腫瘤是一個(gè)很有用的抗體。它適合于各種組織切片，有單克隆和多克隆兩種抗體，應(yīng)用抗原修復(fù)，可獲得更佳結(jié)果。
2.嗜鉻蛋白A（chromogranin A）
該抗體可檢測(cè) 神經(jīng)無和 神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及其來源的腫瘤如：嗜鉻細(xì)胞瘤，甲狀腺髓樣癌，胰島細(xì)胞瘤，垂體腫瘤，類癌等。抗體分為單抗 和多抗，可適合于各類切片，需做抗原修復(fù)。
3.膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrilary acidic protein,GFAP）克隆為6F2
GFAP是中間絲蛋白之一，是星形細(xì)胞和室管膜細(xì)胞及其來源腫瘤的有效標(biāo)記物，據(jù)對(duì)60例星形細(xì)胞瘤的免疫組化顯示，其結(jié)果均為陽性。因此，它是星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室 管膜瘤的抗體。早期使用的有多克隆抗體，近來使用的為單克隆抗體，不需要作任何的處理，適應(yīng)于各種切片。
4.S-100
S-100是從牛腦中分離出來的一種蛋白，經(jīng)大量的研究發(fā)現(xiàn)。它有三種亞形，S-100ao、S-100a和S-100b。它在人的雪旺氏細(xì)胞，室管膜細(xì)胞，星形細(xì)胞， 神經(jīng)纖維，神經(jīng)鞘，皮膚黑色素細(xì)胞等都可檢測(cè)到。因此，它可用于檢測(cè)上述組織及其來源的腫瘤。
該抗體適合于各種切片，不需任何處理，可獲很好結(jié)果。稀釋度為1：200，應(yīng)盡量控制背景。

（六）其它
1.甲狀腺球蛋白（Thyroglobulin,TG）克隆為2H11
TG是甲狀腺濾泡細(xì)胞合成的一種糖白，由于它的特殊關(guān)系，是眾多抗體中特異性較高的一種抗體，僅用于檢測(cè)甲狀腺組織及其來源的腫瘤，不需任何處理，可獲很好結(jié)果，適應(yīng)于各種切片，但應(yīng)請(qǐng)注意控制背景。
2.乳頭狀瘤病毒（Bovine Dapiuomavirus,BPV）
該抗體主要用于檢測(cè)生殖系統(tǒng)傳染性的疾病如尖銳濕疣，病毒存在于上皮的挖空細(xì)胞中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，在檢測(cè)顯色后，并非所有的挖空細(xì)胞都含有病毒，這可能是由于切片或者在制片的過程中，保存不好而丟失。在50例病例的標(biāo)記中，均可見到含量不等的病毒。該抗體為多克隆抗體，應(yīng)用真空負(fù)壓檢測(cè)時(shí)，稀釋度可為1：400，應(yīng)注意背景的控制，不經(jīng)任何處理，也可獲得很好的結(jié)果，適用于各種切片。
3.增殖細(xì)胞核抗原（Proliferation cell nuclear antigen,PCNA）
它是一種酸性蛋白，分子量36KD，在DNA復(fù)制時(shí)為 DNA聚合酶的輔助物，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期時(shí)，此蛋白即已出現(xiàn)。它是細(xì)胞增殖周期的標(biāo)記物，尤其是“S”期。適用 于各種切片。
4.牛堿性磷酸酶（Cow calf alkaline phosphalase,CAP）
該抗體可檢測(cè)正常的成骨細(xì)胞，小腸細(xì)胞，前列腺上皮細(xì)胞，全身含有CAP的細(xì)胞。但臨床常用它來檢測(cè)骨腫瘤及前列腺腫瘤CAP的含量，該抗體不需作任何處理，適合于各種切片。
5.雌激素受體，（Estrogen receptor ,ER）
ER是一種具有特定功能的酸性蛋白，是傳遞激素信息的一種特異性的物質(zhì)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，這種物質(zhì)存在于癌細(xì)胞的細(xì)胞核中，如乳腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌，宮頸癌等癌細(xì)胞核中。目前，臨床在治療這些癌癥病人時(shí)，首先需要檢測(cè)ER是否陽性，如為陽性，治療是采用抗激素療法，如為陰性，治療則采用激素療法。總之ER檢測(cè)的陽性與否都直接關(guān)系到治療方案的選擇，是判斷患者預(yù)后的硬性指標(biāo)。但是目前檢測(cè)ER時(shí)，必須要做好充分*的抗原修復(fù)，據(jù)實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，要取得滿意的結(jié)果就必須要做長(zhǎng)時(shí)間的水浴式的抗原修復(fù)，即將切片浸入抗原修復(fù)液的容器中，然后一起置入鍋中煮沸持續(xù)四十分鐘，如果抗原修復(fù)時(shí)間不夠，不充分，切片也可呈陰性。除此之外，也可采用高壓修復(fù)壓，真空負(fù)壓和微波修復(fù)。
6.孕激素受體（Progesterone receptor ,PR）
PR與ER一樣，在乳腺癌，宮頸癌，子宮內(nèi)膜腺癌等的治療中，都 被列為必須檢測(cè)項(xiàng)目，為制定醫(yī)療方案，判斷預(yù)后硬性指標(biāo)，一般的檢測(cè)都是ER和PR同時(shí)進(jìn)行，但陽性可以是兩種都陽性或陰性，或一陰一陽，它們的檢測(cè)方法，抗原修復(fù)都一樣。