分光光度計的基本原理補充

朗伯-比爾定律是比色分析的基本原理，這個定律是有色溶液對單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。

1.朗伯定律

一束單色光通過溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的強度就要減弱：若溶液濃度不變，則溶液的厚度愈大（即光在溶液中所經過的途徑愈長），光的強度減低也愈顯著。

2.朗伯-比爾定律

如果同時考慮吸收層的厚度和溶液濃度對光吸收的影響，則必然將朗伯定律和比爾定律合并起來，吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比，這就是朗伯-比爾定律。

分光光度計工作原理的限制性條件分光光度計的工作原理是是物質對光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。

論瑯伯-比爾定律的限制性條件：

其一：通過溶液的光必須是平行的；

其二：通過溶液的光必須是單色光；

其三：待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過高，這是瑯伯-比爾定律首要的三個前提條件。

在實際的分光光度計的制造和使用過程中這三個條件是不可能達到的：

其一：因為光是直線傳播的，在分光光度計制造過程中，燈源發出的光是發散的，經過聚焦鏡進行聚焦等直到經過溶液的整體過程中，光是不可能平行的。

其二：燈源發出的光是復合光，經過狹縫，再經過光柵分光等步驟，因為受到狹縫和光柵本身的限制，光柵分光不可能達到純單色光。還有光度計的整體設計問題，光度計不可能沒有其它的雜光存在。

其三：用戶的溶液也不可能是純凈的，也會含有一些雜質，這些對光度的吸收都會存在影響。

除以上三個方面的影響外，在實際的光度計應用過程中還會存在其他因素的影響，例如：

1、經過比色皿的光是否垂直；