北京慧德易教您怎樣選擇色譜柱   

現代液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。

1.硅膠基質填料

（1）正相色譜    正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica） 以及其他具有極性官能團，如胺基團（NH2APS）和氰基團（CN,CPS）的鍵合相填料。

由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。

    正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

（2）反相色譜反相色譜用的填料常是以硅膠為基質表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。

反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

樣品流出色譜的順序是極性較強的組份zui先被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

常用的反相填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優點是在pH值為1~14均可使用。

相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。

    現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。

3.其它無機填料

    其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質，一般于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體，又由于在HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩定色譜柱柱床，其優點是可在pH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用。新型氧化鋯基質色譜填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用pH范圍1~14，溫度可達100℃。由于氧化鋁填料是zui近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行中。

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