国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>其他文章>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

利用玻璃微珠裂解酵母細胞

來源:上海寶葉生物科技有限公司   2012年10月08日 09:17  

裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細胞一起渦旋振蕩進行機械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉動撞擊酵母菌從而機械破碎裂解酵母細胞。由此可見,這是一種強有力的裂解方法,但在裂解過程中又傳輸大量的能量,導致樣本的變性。因此,和哺乳動物細胞的研究比較,酵母菌的免疫沉淀試驗并不是一個好的方法,特別是研究蛋白質的性質和結構時,該方法是不可取的。

 
    1.準備工作
    由于免疫沉淀有多個步驟,且包括數小時孵育,因此在實驗開始前必須安排好時間,注意適當利用過夜孵育的間隙。這將有助于決定何時開始裂解細胞。同時應注意,
酵母菌免疫沉淀的本底水平非常高,因此推薦進行預處理和使用蛋白酶。
 
    2.所需溶液
    PBS,裂解緩沖液(含有蛋白酶抑制劑,置冰上預冷),玻璃微珠(500umol/L,冷藏)。
 
    3.操作步驟
    (1)4000g離心5min收集酵母菌,去上清液。重懸浮于PBS,離心,棄去PBS。
    (2)將酵母團再次懸浮于少量預冷的裂解液。通常用大約3倍體積的RIPA緩沖液(150mmol/L NaCl、1%NP-40、0.5%脫氧膽酸鈉、0.1%SDS和50mmol/L Tris,pH8.0)。同時應加入蛋白酶抑制劑。置冰上。
    (3)玻璃微珠(直徑500~mol/L),用1mol/I鹽酸和裂解緩沖液分別洗滌2次。然后置于少量裂解緩沖液內,413保存。
    (4)在重懸浮的酵母細胞內加入等體積預冷的玻璃微珠。
    (5)劇烈渦流振蕩30s,重復操作直至大部分酵母細胞裂解。
    (6)將細胞裂解物連同玻璃微珠以10 000g離心5min。仔細吸取上清液盛于另一試管,置冰上。
此時,上清液可以用于下一步預處理。
 
    4.常見問題
    該方法常見問題是蛋白質抗原的變性。解決方法是用某些能破壞細胞壁的酶處理酵母菌使其形成原生質體,然后再用去污劑將其裂解。這是一個有效的方法,但酶的價格昂貴,限制了該方法常規應用于大容量標本的制備。然而對于所研究的關鍵蛋白的精細分析,仍不失為一個有效的方法。

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 永嘉县| 彰化县| 溧阳市| 江源县| 甘南县| 荃湾区| 萝北县| 景谷| 平塘县| 新宁县| 吴桥县| 漳浦县| 宁安市| 孝昌县| 大兴区| 化隆| 福鼎市| 彭泽县| 永吉县| 兴海县| 呈贡县| 军事| 当阳市| 晴隆县| 霍山县| 和静县| 临泉县| 德惠市| 彭州市| 福清市| 乐亭县| 衡南县| 南平市| 江永县| 海宁市| 芮城县| 汝阳县| 枣强县| 瓮安县| 齐齐哈尔市| 九寨沟县|