人核轉錄因子κB-P65ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：
NF-κB-P65試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知NF-κB-P65濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將NF-κB-P65和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中NF-κB-P65的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：8.0umol/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗NF-κB-P65抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

人核轉錄因子κB-P65ELISA 檢測試劑盒自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
8.0 umol/L （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
4.0 umol/L （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.0 umol/L （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.0 umol/L （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.5 umol/L （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.25 umol/L （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 umol/L （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

人核轉錄因子κB-P65ELISA 檢測試劑盒建議使用的實驗方案
 標準品濃度（umol/L） 
A 8.0 8.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 4.0 4.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 2.0 2.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 1.0 1.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 0.5 0.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 0.25 0.25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的NF-κB-P65標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的NF-κB-P65含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-8.0umol/L

4、敏感度： 0.01 umol/L
人干細胞因子/肥大細胞生長因子（SCF/MGF）ELISA試劑盒 Human Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA試劑盒
人可溶性CD40配體（sCD40L）ELISA試劑盒  Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISA試劑盒
人可溶性CD30配體（sCD30L）ELISA試劑盒  Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISA試劑盒
人正常T細胞表達和分泌因子（RANTES/CCL5）ELISA試劑盒  Human regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA試劑盒
人P選擇素（P-Selectin/CD62P/GMP140）ELISA試劑盒 Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA試劑盒
人血血小板衍生生長因子AB（PDGF-AB）ELISA試劑盒 Human Plaet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA試劑盒
人血血小板衍生生長因子可溶性受體α（PDGFsR-α）ELISA試劑盒 Human Plaet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA試劑盒
人神經營養因子4（NT-4）ELISA試劑盒 Human Neurotrophin 4,NT-4 ELISA試劑盒
人神經營養因子3（NT-3）ELISA試劑盒 人神經營養因子3（NT-3）ELISA試劑盒
人的神經生長因子（NGF）ELISA試劑盒  Human Nerve growth factor,NGF ELISA試劑盒
人巨噬細胞炎性蛋白3β（MIP-3β/ELC/CCL19）ELISA試劑盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-3β,MIP-3β ELISA試劑盒
人巨噬細胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）ELISA試劑盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA試劑盒
人巨噬細胞炎性蛋白1β（MIP-1β/CCL4）ELISA試劑盒  Human Macrophage Inflammatory Protein-1β,MIP-1β ELISA試劑盒
人黏膜地址素細胞黏附分子（MAdCAM-1）ELISA試劑盒 Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 ELISA試劑盒
人β干擾素（IFN-β/IFNB）ELISA試劑盒 Human Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA試劑盒
人可溶性CD38（sCD38）ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 38,sCD38 ELISA試劑盒