盡管T7 RNAP在mRNA合成中發(fā)揮著重要作用，但實(shí)際操作中經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生double-stranded RNA（dsRNA）副產(chǎn)物。dsRNA是許多病毒的標(biāo)志之一，因此它容易被細(xì)胞內(nèi)的dsRNA結(jié)合蛋白識(shí)別，并觸發(fā)先天免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)。這意味著，如果mRNA制劑中含有較高的dsRNA，可能會(huì)導(dǎo)致不必要的免疫激活，進(jìn)而影響治療效果或引起副作用。過多的dsRNA也可能會(huì)干擾mRNA的正常功能，包括翻譯效率和mRNA的穩(wěn)定性，間接影響mRNA治療的效果。

圖1.dsRNA副產(chǎn)物的影響與優(yōu)化后的T7 RNAP反應(yīng)[1]

因此，開發(fā)和采用有效的方法來減少dsRNA的生成是mRNA技術(shù)發(fā)展中至關(guān)重要的一部分。研究者們已經(jīng)開發(fā)了多種策略，包括使用改良的T7 RNA 聚合酶，化學(xué)修飾核苷、調(diào)整 IVT 轉(zhuǎn)錄buffer，下游純化工藝等方法。翌圣生物利用其ZymeEditor定向進(jìn)化平臺(tái)的能力，持續(xù)在進(jìn)化mRNA體外合成的核心酶原料—T7 RNA聚合酶，開發(fā)出一款低dsRNA T7 RNA 聚合酶，抑制T7 RNA 聚合酶的RDRP活性，從根本上降低dsRNA的形成，從而可以大幅度降低dsRNA的含量。

• 產(chǎn)量：穩(wěn)定在9mg/mL以上；

• dsRNA含量：dsRNA的含量顯著降低了至少10倍以上；

• 片段加帽率高：均超過99%。

翌圣公開的文章《FADS and semi-rational design modified T7 RNA polymerase reduced dsRNA production, with lower terminal transferase and RDRP activities》闡述了一項(xiàng)創(chuàng)新性研究。基于這項(xiàng)研究成果，翌圣已向中國(guó)、美國(guó)提交了申請(qǐng)。