原理：葡萄球菌腸毒素屬于超抗原，能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子，可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原（例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB)）來測定。SEB是一種細菌毒素，能夠與抗原呈遞細胞 (APC) 和 TCR上的MHCII類分子結(jié)合，誘導促炎細胞因子的釋放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。

應(yīng)用舉例：誘導活化T細胞

一、將 PBMCs（120 K/孔）與 Nuclight 綠色試劑標記的 Ramos 細胞（40 /孔）進行共培養(yǎng)。使用 CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE 抗體或葡萄球菌腸毒素 B (SEB) 誘導活化。在 60 h 時，使用 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導的細胞殺傷分析試劑盒和 T 細胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合 iQue® 3 系統(tǒng)分析 10 µL 樣本。

每種活化因子會導致不同的 CD3+ T 細胞蛋白表達和殺傷特征：

1.CD3/CD28 Dynabead 誘導的 T 細胞活化呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的微球數(shù)量對應(yīng)于最大的活化標志物表達百分比。該結(jié)果與高水平的細胞耗竭標志物呈現(xiàn)相關(guān)性。

2.與 Dynabead 和 SEB 相比，CD3×CD19 BiTE 抗體介導的靶細胞死亡增量最多，活化和耗竭水平顯著降低。這說明 BiTE 介導的免疫細胞殺傷時間可能持續(xù)的較長。

3.SEB 刺激，即使在zui低濃度下，也可使 T 細胞活化并產(chǎn)生最大殺傷率，導致高水平的 T 細胞耗竭。

原理：葡萄球菌腸毒素屬于超抗原，能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子，可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原（例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB)）來測定。SEB是一種細菌毒素，能夠與抗原呈遞細胞 (APC) 和 TCR上的MHCII類分子結(jié)合，誘導促炎細胞因子的釋放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。

二、使用來自 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導的細胞殺傷分析試劑盒和 T 細胞耗竭分析試劑盒的 Qbeads 測定 Nuclight 綠色標記的 Ramos 和 PBMC（3:1 比例）共培養(yǎng)時細胞因子的釋放數(shù)據(jù)。在多個試劑盒中均檢測了 IFN? 和 TNFa 的濃度，以便將所有試劑盒的測定結(jié)果取平均值。

各個活化因子對細胞因子分泌和對表面蛋白表達的影響相當：

1.在使用的微球數(shù)量范圍內(nèi)，CD3/CD28 Dynabead 誘導的細胞因子釋放呈濃度依賴性增加。

2.與微球或 SEB 相比，CD3×CD19 BiTE 刺激后的細胞因子釋放始終較低（最高刺激濃度下的顆粒酶 B 濃度除外）。該結(jié)果表明，在降低毒性風險的情況下（例如細胞因子釋放綜合征），可以實現(xiàn)高水平的細胞殺傷。

3.SEB 可誘導高水平的細胞因子釋放（即使在低濃度下）。

三、將 PBMCs（25 K/孔）與貼壁 AU565 細胞（5 K/孔）進行共培養(yǎng)。使用 SEB 誘導 T 細胞活化。在 60 h 時，使用 T 細胞活化分析試劑盒、T 細胞介導的細胞殺傷和 T 細胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合 iQue® 3 系統(tǒng)提取靶細胞和效應(yīng)細胞，進行終點分析。

SEB 活化誘導靶細胞殺傷呈濃度依賴性增加，伴隨 CD3+ T 細胞上活化（CD69、CD25 和 HLA-DR）和耗竭（PD-1、LAG-3 和 TIM-3）標志物的高表達（在所有使用的 SEB 濃度中均是如此）。

其他應(yīng)用：抗體制備、毒素檢驗、多種免疫和偶聯(lián)試驗、藥物研發(fā)等。

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