產品介紹

阿爾瑪藍（Alamar Blue）是一種氧化還原指示劑，能根據代謝活性產生吸亮度變化和熒光信號。這是一種安全無毒的染料，可用于細胞活性和細胞增殖的定量分析以及細胞因子生物測定和體外細胞毒性研究，能有效測定動物、真菌和細菌細胞的天然代謝活性。

技術原理

Alamar Blue在氧化狀態下呈現紫藍色無熒光性，而在還原狀態下，轉變為呈粉紅或紅色熒光的還原產物，反映所研究的細胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細胞和細菌的代謝活動。

這種測定是基于具有代謝活性的細胞將試劑轉換成熒光和比色指示劑的能力。在細胞增殖過程中，細胞內NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環境。攝入細胞內的染料被這些代謝中間體及細胞色素類還原后釋放到細胞外并溶于培養基中，使培養基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。受損和無活性細胞具有較低的天然代謝活性，因此對應的信號較低。可以用普通分光光度計或熒光光度計檢測，其激發光波長在530-560 nm之間，發射光波長為590 nm。吸光度和熒光強度與活性細胞數成正比。

產品特點

本品可廣泛地用于細胞增殖代謝，藥物的細胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。 與臺盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar Blue具有更多的優勢。Alamar Blue采用單一試劑，可以連續、快速地檢測細胞的增生狀態。由于Alamar Blue對細胞無毒、無害，不影響細胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對同一批細胞的增生狀態進行連續觀察和進一步的實驗觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾細胞正常代謝的特點。 

運輸與保存方法 

冰袋運輸。4oC避光保存，一年有效。

使用方法

一、制作標準曲線（測定最佳孵育時間和細胞數量）

1、每孔加入100微升細胞懸液（對數生長期細胞），對細胞計數。按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復孔。

注：設置陰性對照：細胞培養基中不加入細胞；陽性對照：100微升100%還原型Alamar Blue（不含細胞）。

2、每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

3、放入細胞培養箱內培養（37℃,5% CO2）一定時間。培養基的顏色由靛青藍開始變成粉紅色就可以進入下一步。

4、繪制標準曲線。

二、細胞毒性和細胞增殖檢測

1、每孔加入100微升細胞懸液（對數生長期細胞），對細胞計數。建議細胞數量為104/mL，具體每孔需要的細胞數量，需根據細胞類型決定。

2、 細胞中加入待檢測藥物，為檢測藥物對細胞增殖的作用，請設置合適的對照組，包括刺激細胞和非刺激細胞。

3、混勻，放入細胞培養箱內孵育（37℃，5% CO2）一段時間。

4、每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

5、放入細胞培養箱內孵育（37℃，5% CO2）4 - 8 h，最佳孵育時間取決于細胞類型。培養基的顏色由靛青藍開始變成粉紅色就可以進入下一步。

6、推薦用熒光分光光度計檢測，激發光波長在530-560 nm之間，發射光波長為590 nm。

7、普通分光光度計在570nm測定吸光度，參考波長600 nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

常見問題

Q：還原率的計算其中一步是還原型陽性對照熒光值減去陰性對照的熒光值，減去后成負值？

A：陽性對照的值比實驗組高，需要重新制備。陽性對照是100%還原的，高溫使得阿爾瑪藍變成還原態的。

Q：Alamar Blue 阿爾瑪藍,使用是需要高壓滅菌是吧?

A: 阿爾瑪藍本身是無菌的。只有制備還原型的時候需要滅菌。不能對濃縮的Alamar Blue高壓滅菌。

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