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非病毒細胞轉染方法|Lonza Necleofector入核電轉技術

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2024年11月19日 17:22  

///Lonza Nucleofector

超高引用值得信賴

非病毒轉染


動圖封面






Nucleofector電轉技術



細胞轉染有許多不同的方式,常用于實驗室的就是脂質體轉染、病毒轉染以及電穿孔法。

傳統的電穿孔技術需要摸索步驟進行優化,轉染位置為胞質,細胞毒性大,轉染效率難以得到保證。但Lonza公司對電穿孔技術進行了優化,通過配合高效率的細胞轉染液、預置的優化好的轉染程序,直接將外源基因導入目標細胞,實現更高轉染效率、更高細胞存活率,最快在轉染2小時后就能觀察到轉染基因的蛋白表達。


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原理與優勢




Nucleofector技術原理:高效的非病毒的DNA轉運,適用于原代細胞或是細胞系,可直接轉運入細胞核。

主要優勢:

· 基因轉染效率高

· 轉染與細胞分裂無關

· 可實現非分裂細胞的轉染,如神經元細胞

· 更快的基因表達

· 通用性:可轉染質粒DNA,DNA單鏈,mRNA或是siRNA,可適用于原代細胞或是細胞系。




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不同轉染模塊




Core Unit:核心模塊,控制系統,能夠加載程序,實現細胞轉染功能。





X Unit:能夠實現懸浮細胞的轉染,可以以20ul,100ul的體系進行轉染。





Y Unit:能夠實現貼壁細胞的轉染,可直接在24孔板內進行轉染。





96-well Unit:可在96孔板內進行檢測,可應用于原代細胞以及難轉染細胞。


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實驗步驟簡單






Step 1:將目標細胞從培養皿或培養瓶中收集起來。







Step 2:將細胞與轉染試劑、需轉入的物質(DNA或siRNA)混勻,并轉入電極杯中。







Step 3:選擇合適的程序,將電極杯或電極條插入儀器中,按下Start按鈕。







Step 4:用培養基沖洗,將細胞沖洗下來






Step 5:將沖洗后的培養基轉移至培養皿中,在一定時間后即可檢測轉染效率。


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基因表達快速











TMR標記的DNA表達eGFP的質粒轉染新生兒皮膚成纖維細胞(NHDF-neo),兩小時后用 3.5%PFA固定,共聚焦顯微鏡可觀察到GFP蛋白在細胞核內表達。

05


應用領域多樣








免疫、腫瘤、代謝、神經等研究領域的不同細胞,難以進行轉染的細胞、無法分裂的細胞,都可以實施轉染。

06提供多種工具






從轉染方法到細胞培養知識,不同的轉染細胞種類,適用的不同轉染方法,都能在Lonza找到答案。


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