薄層色譜分析(TLC)是快速分離分析少量物質的一種很重要的實驗技術,主要用于藥品的鑒別、 雜質檢查,也用于跟蹤化學反應進程。
薄層色譜法基本原理
薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法,它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同,使在流動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中,連續地產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,從而達到各成分互相分離的目的。
薄層色譜法基本原理
薄層色譜法經典操作
01 點樣
點樣一般為圓點(不能太大)點樣基線距底邊0.5~1.0 cm,點樣直徑為1-2 mm 點間距離約為0.5~1.0 cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜;
02 展開
1、化合物分離效率大小用 Rf(化合物距離基線的距離除以溶劑的前沿距基線的距離 )值表達,Rf值最-好在0.15~0.85之間,盡量控制主要物質Rf值在0.3~0.7之 間。
2、展開劑的選擇:常用的溶劑組合有:石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇、石油醚/丙酮、石油醚/二氯甲烷、乙酸乙酯/甲醇、乙酸乙酯/四氫呋喃、氯仿/乙酸乙酯 、乙睛/水等。
03 顯色
遵循:一看、二照、三碘、四顯。首先在日光下觀察,劃岀有色物質的斑點位置; 在紫外燈下觀察有無暗斑或熒光斑點;紫外吸收很弱的物質,可以用碘缸進行顯色 無色又無紫外吸收且在碘缸中不顯色的物質,可以根據化合物的顯色基團選擇顯色劑顯色。
薄層色譜法案例分析
01 薄層色譜法TLC拖尾現象
① 首先考慮的是樣品濃度過大,硅膠板過載導致。這種情況直接降低樣品濃度或者減少上樣量。
② 樣品對硅膠的吸附能力過強導致的拖尾。對不同體系加入不同的調節劑,酸體系加冰醋酸,堿體系加氨水/三乙胺。
薄層色譜法TLC拖尾現象
02 薄層色譜法TLC邊緣效應
原因:當展開劑在薄層上展開時,極性較弱的展開劑和揮發較強的展開劑在薄層兩邊較易揮發,它們在薄層兩側的濃度比在中部的濃度小,因此產生了邊緣效應。
解決方案:點樣時,板子兩邊空出0.5 cm邊際
03 薄層色譜法TLC分離效果差
原因:分離效果差的主要原因包括展開劑的選擇、展開方式以及實驗環境條件。
解決方案:根據樣品的性質選擇合適極性/體系的展開劑;避免點樣過量或不均勻;優化展開方式,選擇最-適合的上行或下行展開方式;控制實驗環境的溫濕度,確保硅膠不吸潮。
04 薄層色譜法TLC樣品跑散/沖頂
原因:可能是樣品中有大極性溶劑、展開劑極性太大、硅膠板吸潮。
解決方案:在點板前,先用吹風機將硅膠板吹干,點樣后,再將樣品溶劑吹干,選用極性適合的展開劑。
原因:可能包括展開劑選擇不佳、樣品濃度過低、顯色劑選擇不當等。
解決方案:
① 展開劑選擇不佳,可能導致斑點重合或不明顯。可嘗試不同類型、比例的展開劑,多次嘗試以找到最-佳的展開劑組合。
② 調整樣品的濃度,以便在薄層色譜板上形成更明顯的斑點。
③ 選擇正確的顯色劑對樣品的顯色起到至關重要的作 用,如含氮(伯、仲)化合物選用茚三酮顯色劑,含還原性基團化合物(羥基、氨基 、醛)選用高猛酸鉀顯色劑,生物堿選擇硫酸鈰顯色劑等。
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