裝備應考慮的主要問題及功能配置
通用實驗室醫用離心機可能會深入到每一個技術相關實驗室,是一個潛在發展的市場,應當引起裝備管理方面的高度重視。在明確實驗室的主次技術需求及相應離心方法的前提下,zui大rcf、rpm、樣品量是選擇離心技術的基本參數,要在此基礎上考慮離心機的選型、主要功能及兼顧功能的配置。
3.1醫用實驗室常規離心技術功能需求
3.1.1RNA離心制備
培養細胞在低速離心(水平轉頭,300xg)完成細胞分離、裂解后,加RNA沉淀提取液,于4℃,10000~12O00xg(角轉頭,微量1.5/2.0mlEppendorf管,或≥15ml、50ml管)分步提?。唤M織樣本需先經勻漿預處理。
3.1.2DNA離心制備
水平轉頭,2000xg左右,1.5/2.0mlEppendof管,15ml、50mlFalcon管或更大體積;再經12000~27000xg。制備質粒DNA:角轉頭,250ml或500m1/瓶,5000-6000xg;15-50rnl/管,12000~27000xg;4℃或特定溫度。
3.1.3載體表達蛋白分離
角轉頭,250~500ml/瓶,4000xg;15~50mlFalcon管,3O00xg;角轉頭,50ml管/瓶,27000xg;4℃。
3.1.4細胞純化和亞細胞器分離
用差速離心法分離細胞器和大小差別懸殊的細胞。由低速分步到高速離心,細胞器的沉降順序是細胞核、線粒體、溶酶體、過氧化酶體、內質網、高爾基體、核蛋白體,所有過程控溫4℃。
收集細胞:水平轉頭,850~1850xg,優選錐形底管;分離細胞核和細胞質,3300xg;核提取,25O00xg。進一步純化分離將聯用超速離心。
密度梯度速率沉降法分離密度相近而大小不等的細胞或__細胞器。采用合適的密度梯度介質,水平轉頭,1OOxg左右。等密度梯度法分離細胞器,10000-30O00xg。
3.1.5細胞學涂片離心通過在個別機型上配置細胞學涂片離心轉頭,實現一次4片離12,;據細胞學特性,rc啦制在5O~1000xg。選購時需注意離心容器的zui小樣品處理量。
3.1.6離心超濾、濃縮、抽提
配合市售離心過濾濃縮管(1.5~80ml,Coming,Millipore,Spectrum等)或樣品抽提容器使用,采用角轉頭或水平轉頭,角轉頭可使超濾膜與離心力不成直角而避免濃度極化;1000~l2O00xg不等,可參考所購容器的使用說明。
3.1_7微孔板離心
酶標板、TC板、PCR板以及樣品抽提純化板的離心,在通用離心機可通過在大容量水平轉頭上配置微孔板吊架(rcf_-般將低于轉頭的額定值)或選用專門離心轉頭實現,≥1O00xg。每個吊架可放1~4塊標準96孔板或更多。
注:
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