瑞士步琦
SFC 分離木犀草素
SFC應用
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簡介
紫蘇(Perilla frutescens)是一種草本植物,其葉和種子中含有多種生物活性成分,包括木犀草素(Luteolin),這是一種具有多種藥理作用的黃酮類化合物。木犀草素具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等生物活性。
▲ Luteolin
采用傳統的 Prep HPLC 方式雖然可以將木犀草素從紫蘇提取物中進行分離,但是制備時間較長且流動相損耗量較高,無論從時效性還是經濟效益角度出發,都不是最佳的選擇。
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常規制備色譜洗脫條件
C18, 10x250mm, 15um
梯度洗脫, 水/乙醇 +1% 甲酸
進樣量:0.5mL
流速:15mL/min
▲ 木犀草素色譜峰在 36min 之后
除了洗脫時間較長之外,由于流動相中水的存在,也給后續木犀草素樣品的濃縮帶來一定的麻煩。(即使步琦的旋轉蒸發儀能夠解決這一問題)。
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采用 SFC 樣品純化
那么是否可以采用超臨界流體色譜(SFC)的方式進行樣品的純化呢?
首先我們采用 Sepmatix SFC 8X 平行液相色譜快速篩選適合于木犀草素分離的色譜柱。
實驗條件:
流速:3mL/min
運行時間:15min
梯度洗脫 10-60% 甲醇
▲ 紫蘇提取物在 PEI 色譜柱上具有更好的分離效果
之后采用 Prep SFC-50 對樣品進行大量分離與制備。
實驗條件:
PEI, 10x250mm, 5um
梯度洗脫 20-40% 甲醇 5min
進樣量:0.3mL
流速:20mL/min
▲ 木犀草素色譜峰在 2min 之后
兩種不同分離方式對比:
萃取條件 | Prep HPLC | Prep SFC |
木犀草素色譜峰 | 36min 之后 | 2min 之后 |
總運行時長 | 42 min + 15 min平衡 | 8 min + 1 min 平衡 |
總溶劑使用 | 390ml ethanol + 240ml water | 50 ml methanol |
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實驗結論
通過對比發現,SFC 在分離木犀草素的過程中,無論從時效性還是溶劑消耗量上都優勢明顯。
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