什么是分光熒光計(jì)?
分光熒光計(jì)是一種分析樣品中分子和離子發(fā)出的光的設(shè)備。
光譜儀的一種,其他例子包括紫外/可見分光光度計(jì)和紅外分光光度計(jì)。由于每個(gè)分子和離子的發(fā)射光譜都不同,因此可以根據(jù)發(fā)射峰的波長和強(qiáng)度來定量樣品中所含的成分。
熒光分光光度計(jì)極其靈敏,用于檢測痕量成分。此外,在生物化學(xué)領(lǐng)域,它與結(jié)合特定化合物的熒光探針結(jié)合使用,以分析生物體中蛋白質(zhì)的運(yùn)動(dòng)。
此外,在含有多種成分的樣品中,例如生物體和食品,每種成分的排放重疊,導(dǎo)致復(fù)雜的光譜,然而,最近,通過應(yīng)用多變量分析等統(tǒng)計(jì)分析方法,可以對多種成分進(jìn)行分析。還正在考慮提取信息。
熒光分光光度計(jì)的應(yīng)用
使用熒光分光光度計(jì)方法進(jìn)行的定量分析一般比分光光度法靈敏1000倍以上,因此熒光分光光度計(jì)用于檢測和定量樣品中所含的微量成分。
具體而言,我們測量作為白光LED和有機(jī)EL器件的發(fā)光效率指標(biāo)的量子產(chǎn)率,并分析器件發(fā)出的光的光譜。頻譜分析極其復(fù)雜,但分析軟件也變得越來越復(fù)雜,可以提取多種信息。
熒光分光光度計(jì)原理
圖1 熒光分光光度計(jì)原理
分光熒光計(jì)是一種使用熒光(或磷光)的設(shè)備,當(dāng)分子和離子的電子從激發(fā)態(tài)返回到基態(tài)時(shí),它會(huì)以光的形式發(fā)射多余的能量。每個(gè)分子都具有自己的能態(tài),并選擇性地吸收特定波長的光以躍遷到激發(fā)態(tài)。
處于激發(fā)態(tài)的電子立即返回到基態(tài),但此時(shí)它們發(fā)出的光的波長與激發(fā)態(tài)和基態(tài)之間的能級(jí)差相對應(yīng)。請注意,除非將照射光設(shè)置為樣品吸收的波長,否則不會(huì)發(fā)射熒光,并且無法進(jìn)行測量。
有關(guān)分光熒光計(jì)的其他信息
1. 熒光分光光度計(jì)和多變量分析
圖 2. 熒光分光光度計(jì)和多變量分析
通過對含有大量有機(jī)物質(zhì)的樣品(例如食品)進(jìn)行熒光測量,正在嘗試分析可按原產(chǎn)地或原材料進(jìn)行分類的模式。當(dāng)樣品含有多種成分時(shí),熒光分光光度計(jì)測量得到的光譜是每種成分發(fā)出的熒光之和。
一般來說,含有多種成分的樣品的熒光光譜極其復(fù)雜且難以分析。特別是在含有許多有機(jī)物質(zhì)的樣品中,例如食品和飲料,會(huì)出現(xiàn)許多峰,只能由專家進(jìn)行分析。
另一方面,最近,人們嘗試使用多元分析和統(tǒng)計(jì)分析方法從食品和其他材料的復(fù)雜發(fā)射光譜中獲取信息。例如,通過使用作為多變量分析方法的主成分分析(PCA),可以將諸如光譜之類的多維數(shù)據(jù)壓縮成二維或三維。
通過根據(jù)降維后每個(gè)樣本的分布將樣本分組來進(jìn)行分析。
2. 熒光分光光度計(jì)在生物化學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
圖 3. 熒光分光光度計(jì)的使用
在生物化學(xué)領(lǐng)域,通過將熒光探針選擇性地與特定蛋白質(zhì)、鈣離子等結(jié)合,可以對相關(guān)成分進(jìn)行定量。例如,在鈣離子的檢測中,可以使用稱為螯合劑的化合物,其具有選擇性地夾緊離子的結(jié)構(gòu)。
此外,經(jīng)生物來源熒光蛋白修飾的聚合物也可用作熒光探針。這種聚合物源自熒光蛋白,它的引入使活細(xì)胞能夠自我復(fù)制。
諾貝爾獎(jiǎng)獲得者日本科學(xué)家下村修因發(fā)現(xiàn)這種綠色熒光蛋白而受到贊譽(yù)。生物分子的分析已經(jīng)取得了長足的進(jìn)步,因?yàn)橐呀?jīng)可以將熒光蛋白引入生物分子中,并可以使用熒光計(jì)進(jìn)行高靈敏度的檢測。
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