為什么要脫鹽,有什么好處?
保護您的數據和質譜儀(MS)
使用質譜進行完整蛋白和亞基分析時,非常希望在分析前去除不需要的成分。樣品前處理不僅可用于提高數據質量,也是保護質譜儀的一種方式。非揮發性樣品緩沖液會導致質譜中出現鹽加合物以及分子量計算不準確。這種鹽還會快速污染離子源,甚至在儀器內部中進一步降低靈敏度并造成儀器停機清潔。花費 10–15 分鐘從樣品基質中除去鹽,或將樣品交換到 MS 兼容的揮發性緩沖液中,可以提高質量準確度并保護儀器。
對合成寡核苷酸快速脫鹽
對于詳細表征、配制或大分子寡核苷酸 HPLC,通過離子對反相或強陰離子交換進行純化是獲得高純度樣品的關鍵。但對于某些應用(如微陣列芯片、測序)中使用或作為 qPCR 引物中使用的小分子寡核苷酸(約 36 個堿基或更少),采用快速簡單的脫鹽步驟,即合成、剪切和脫鹽保護步驟去除小分子副產物就已經足夠。
確保使用 InstantPC 標記的多聚糖實現靈敏的 N- 糖分析
使用 InstantPC 試劑盒的 Agilent AdvanceBio Gly-X N- 糖前處理可在最短一小時內完成樣品釋放和 N- 糖標記。為獲得這一多聚糖分析的理想分析靈敏度,需要將起始糖蛋白溶于相容緩沖液中。InstantPC 與伯胺反應標記游離 N- 糖,因此含有伯胺的任何緩沖液將與多聚糖發生競爭標記。將緩沖液快速交換為非伯胺緩沖液(如 HEPES),有助于確保用戶獲得盡可能高的靈敏度。
AdvanceBio 脫鹽產品有什么優勢
在 10–15 分鐘內完成樣品前處理
用于分子量超過 5 kDa 的蛋白質、大于 10 個堿基對的寡核苷酸或核苷酸
有三種產品形式:樣品體積 < 100 µL 或 < 1000 µL 的單個離心柱,以及樣品體積 < 50 µL 的 96 孔板
< 100 µL 的樣品達到 99% 鹽去除,< 1000 µL 的樣品達到 > 95% 鹽去除,樣品回收率 > 90%
在 pH 2.0–13.0 范圍內穩定
兼容所有常用緩沖液,以及濃度高達 0.2 mol/L NaOH、0.2 mol/L HCl、1 mol/L 乙酸、8 mol/L 尿素、6 mol/L 鹽酸胍、1% SDS、24% 乙醇、30% 丙醇或 30% 乙腈的溶液
工作原理
凝膠過濾或體積排阻色譜法(SEC)是一種基于分子大小的分離方法。在這種情況下,使用凝膠過濾進行組分分離,將高于截留分子量的樣品組分與低于截留分子量的所有組分分離。大于 5 kDa 的蛋白質或長度超過 10 nt 或 bp 的寡核苷酸太大,無法有效地進入顆粒的孔隙結構,因此作為一個組分首先洗脫。較小的基質組分和緩沖液鹽可以更有效地進入到顆粒的小孔中,從而保留在色譜柱上。
使用 AdvanceBio 離心柱(< 1000 µL)
部件號 1980-1105 中包含的半制備級離心柱旨在用于 50 mL 離心管:一個用于清洗步驟,另一個用于收集樣品。如圖所示,離心柱通過一個白色的塑料小適配器固定在樣品瓶頂部。部件號 1980-1105 每包包含四個可重復使用的適配器。還可通過部件號 1980-1106 額外訂購 8 個適配器。如果您需要離心管,安捷倫提供兩種包裝規格,部件號 5610-2049,25/包和 190065200,500/包。
使用 AdvanceBio 離心 96 樣品板
高通量 96 樣品板需要單獨的 96 孔板進行清洗和樣品收集步驟。對于清洗步驟,我們建議使用部件號 5043-9308;對于樣品收集步驟,我們建議使用 V 形 96 樣品板,如 5043-9312。離心期間,AdvanceBio 離心 96 樣品板將堆疊在清洗或樣品收集板的頂部,因此請確保離心機可以容納堆疊后的孔板(高 5.1 cm)。
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