大鼠血漿（去紅細(xì)胞、無菌過濾）

血清使用注意事項：

防止發(fā)病免疫血清多用馬、牛血液制備，馬、牛血清對其它動物來說，也具有抗原性，有引起血清病的可能，因此，使用免疫血清要注意防止引起血清病，預(yù)防的主要措施是使用提純的制品，不用不合格的產(chǎn)品；另外，不要有急功近利的想法，要按照要求劑量使用，一次用量不可過大。

大鼠小鼠取血操作步驟：

1.剪尾采血  

小鼠每次采血量0.1ml，大鼠每次采血量0.3-0.5ml

左手拇指和食指從背部捉住鼠頸部皮膚，將鼠頭朝下，鼠保定后將其尾巴置于50℃熱水中浸泡數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。擦干尾部，再用剪刀或刀片剪去尾尖1-2mm，用試管接流出的血液，同時自尾根部向尾尖按-摩。取血后用棉球壓榨止血并用6%液體火棉膠涂在傷口處止血。

2.去除眼球采血

小鼠采血量0.5-1ml

左手捉住小鼠頸部皮膚，輕壓在實驗臺上，取側(cè)臥位，左手食指盡量將小鼠眼周皮膚往頸后壓，使眼球杰出。用眼科彎鑷迅速夾去眼球，將鼠倒立，

用器皿接住流出的血液。采血完畢立即用紗布壓榨止血。大鼠少用。

3.心臟采血

小鼠采血量0.5-0.6ml，大鼠采血量1-1.5ml

鼠仰臥位固定，剪去胸前區(qū)被毛，皮膚消毒后，用左手食指在左側(cè)第3-4肋間觸摸到心搏處，右手持帶有4-5號針頭的注射器，選擇心搏zui強(qiáng)處穿刺，當(dāng)刺中心臟時，血液會主動進(jìn)入注射器。

4.斷頭采血

小鼠采血0.8-1.2ml，大鼠采血量5-10ml

左手拇指和食指從背部捉住鼠頸部皮膚，將鼠頭朝下，右手用剪刀剪斷鼠頸部約1/2-4/5，讓血液流入試管。

5.眼眶靜脈叢采血

小鼠采血量為0.2-0.4ml，大鼠采血量為0.4-0.8ml

取內(nèi)徑為1.0-1.5mm的玻璃毛細(xì)管，臨用前折斷成1～1.5cm長的毛細(xì)管段，浸入1％肝素溶液中，干燥后用。取血時左手捉住鼠兩耳之間的頸背部皮膚以固定頭部，悄悄向下壓榨頸部兩邊，引起頭部靜脈血液回流困難使眼眶靜脈叢充血，右手持毛細(xì)管由內(nèi)眥部刺進(jìn)結(jié)膜，再悄悄向眼底部方向推進(jìn)，悄悄旋轉(zhuǎn)毛細(xì)管以劃破靜脈叢，讓血液順毛細(xì)管流出，接收入事前準(zhǔn)備的容器中。采血后紗布輕壓眼部止血。小鼠、大鼠、豚鼠及家兔均可采納此法取血。刺入深度小鼠為2-3mm，可采血0.2-0.3ml；大鼠為4-5mm，可采血0.4-0.8ml。

Tips：

1. 血清的保存：在-15℃以下血清的有效期為5年，4℃可保存數(shù)周，不宜室溫保存，不宜反復(fù)凍融。配制成培養(yǎng)基后應(yīng)在四周內(nèi)用完，一瓶血清如無法一次用完應(yīng)無菌分裝成恰當(dāng)數(shù)量并冷凍保存。

2、血清中的絮狀沉淀物：血清是多種蛋白質(zhì)的混合物，在凍融過程中會出現(xiàn)絮狀沉淀物，主要原因是由于血清中脂蛋白和纖維蛋白變性所造成。但并不影響血清本身的質(zhì)量和使用。如需去除可先400g離心取上清液配制成培養(yǎng)基再過濾即可使用。

3、血清的解凍：合理的解凍方式可以更好的保護(hù)血清質(zhì)量并可以在上減少絮狀沉淀物的產(chǎn)生。血清從低溫冰箱中取出后，經(jīng)4℃冰箱、室溫、37℃水浴逐步規(guī)則搖晃均勻融解，直至融解后再使用。

4、血清的熱滅活：將血清嚴(yán)格56℃水浴均勻加溫30分鐘可以滅活血清中的補(bǔ)體系統(tǒng)。是不是所有用途的血清都需要熱滅活呢？對大多數(shù)細(xì)胞來說是不需要的。激活的補(bǔ)體能參與溶解細(xì)胞，刺激光滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。因此在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌肉細(xì)胞時，建議使用熱滅活血清，在正常情況下加熱處理對血清的促細(xì)胞生長效應(yīng)無明顯促進(jìn)作用，甚至?xí)驗榧訜崽幚碛绊懷宓馁|(zhì)量。

5、血清中的“小黑點”現(xiàn)象：血清在經(jīng)過一段時間的低溫凍存再融解后，在正常情況下會出現(xiàn)絮狀蛋白沉淀。但往往有用戶反應(yīng)血清中有“小黑點”現(xiàn)象，認(rèn)為是微生物污染。實驗發(fā)現(xiàn)血清在37℃環(huán)境放置時間過長或經(jīng)過加熱滅活處理，血清中的沉淀物往往會呈增多趨勢，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，讓使用者誤以為是血清遭受微生物污染并在分裂增殖。因此如無必要，可以不進(jìn)行熱滅活處理并保證血清的低溫保存。

大鼠血漿（去紅細(xì)胞、無菌過濾）

實驗證明使用血清時注意以下幾點事項不但可以保證血清質(zhì)量并能給使用者帶來方便：

◎血清可在-15℃以下低溫保存。

◎血清一瓶血清一次無法用完的應(yīng)分裝凍存，分次用完。

◎血清按-15℃以下至4℃至室溫至37℃逐步均勻解凍使用。

◎若非必要，無須進(jìn)行熱滅活。若必須做血清熱滅活的，須嚴(yán)格控制在56℃水浴30分鐘均勻加熱滅活。

血清的定義

血清指血漿除去纖維蛋白原后的膠狀液體。每100ml人血清含有蛋白質(zhì)6-8g，其中主要是白蛋白和球蛋白。血清不會凝固。有免疫，維持酸堿平衡和滲透壓的作用，血清蛋白質(zhì)亦可儲備供給機(jī)體蛋白質(zhì)不足時的應(yīng)用。人和動物的血清常用以進(jìn)行各種血清學(xué)試驗，幫助診斷疾病。含抗體的血清可作為預(yù)防或治療疾病之用

血清的主要成分

血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成，這些化學(xué)成分包括白蛋白，α1、α2、β、γ-球蛋白，甘油三酯，總，谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但仍存在一些問題。主要是：

第一：血清的成份可能有幾百種之多，對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識，這給研究工作帶來許多困難；

第二：血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制；

第三：不能排除血清中含有易變物質(zhì)，這被認(rèn)為是“瓶中惡化”的原因之一