所謂Real-Time PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化,通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。real-time PCR技術即實時熒光定量PCR避免了傳統PCR以終產物監測定量產生的偏差,提高實驗的重復性。該技術已經被廣泛用于監測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果。
Real-Time PCR操作流程
Real-Time PCR操作流程
- 根據已知全長基因序列及待檢基因的背景信息,設計并合成Realtime PCR引物
- RNA抽提:提供組織、細胞等來源樣本的RNA抽提服務,并將RNA反轉錄為cDNA
- 制備標準曲線樣品
- 標準曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應液中,進行RealTime PCR擴增和檢測
- 檢測結果進行標準曲線分析
- 提供實驗報告:包括詳細的實驗方法及實時熒光定量PCR實驗結果的相關圖表。
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